【摘 要】
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目的 Src家族激酶(SFK,Src Family Kinase)中有7种(Src,Fyn,Lyn,Hck,Yes,Lck和Fgr)在血小板上表达,本实验主要研究Lyn和Fyn在血小板激活中的作用及与PECAM-1(血小板内皮细胞
【机 构】
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华中科技大学同济医学院基础医学院药理学系;
【基金项目】
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国家留学基金委青年骨干教师出国留学计划的资助
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目的 Src家族激酶(SFK,Src Family Kinase)中有7种(Src,Fyn,Lyn,Hck,Yes,Lck和Fgr)在血小板上表达,本实验主要研究Lyn和Fyn在血小板激活中的作用及与PECAM-1(血小板内皮细胞粘附分子-1)的关系。方法采用基因敲除小鼠,从腹主静脉取血,分离血小板,洗涤血小板,在血小板聚集仪上用胶原相关肽(CRP)37℃刺激洗涤后的血小板,比较不同组别小鼠的血小板聚集及释放反应;采用免疫共沉淀和免疫印迹法检测Lyn对PECAM-1和Fyn磷酸化的影响及与下游分子的相互作用。结果与野生型比较,Lyn单敲除和PECAM-1单敲除小鼠血小板的反应性增强;但在PECAM-1敲除后,Lyn的野生型和基因敲除型小鼠的血小板的反应性增强的现象消除;在Lyn敲除后,也未见PECAM-1的野生型和基因敲除型小鼠的血小板的反应性的不同。Lyn敲除后,PECAM-1的胞内区的ITIM磷酸化降低,募集的SHP-2亦减少;同时Fyn-C末端酪氨酸位点(pY527)磷酸化降低,而416位酪氨酸位点(pY416)磷酸化增高。结论结果提示Fyn的不同位点酪氨酸的磷酸化参与了Lyn对血小板活性的调节,而Lyn参与了PECAM-1胞内区ITIM的磷酸化,从而负性调节血小板的活性。
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