水稻抗白叶枯病基因Xα23的EST标记及其在分子育种上的利用

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水稻白叶枯病是水稻主要病害之一,尤其在世界各籼稻区经常发生。利用寄主抗性是控制该病的最有效途径。20世纪60 年代以来,国际上鉴定出水稻抗白叶桔病基因近30个,其中 Xa1、Xa5、Xa21、Xa26和 Xa27近年已被分离克隆。在众多的水稻抗白叶枯病基因中,被育种利用的并不多。从我国普通野生稻中鉴定发掘的 Xa23基因,对国内外鉴别菌系都表现为高抗,且完全显性、全生育期抗病,因此对杂交稻的改良具有广阔的应用前景。本文报道2个与 Xa23基因紧密连锁的 EST 标记筛选及其在分子辅助育种上的利用。用水稻抗白叶枯病基园 Xa23的近等基因系 CBB23与其感病轮回亲本 JG30杂交,构建了包含2562个单株的 F2作图群体。用国际鉴别小种 P6进行田间抗性接种鉴定,结果表明,F2植株抗感分离比严格符合3:1,可用于 Xa23基因的分子标记定位。我们在前期分子标记定位基础上,根据日本水稻基因组计划 RGP(Rice Genome Program)的数据,在 Xa23基因目标区选择并合成12个 EST 标记的引物,进行亲本间多态性检测,找到2个在 CBB23与 JC30间有多态性的 EST 标记,C189和 CP02662。用该标记对 F2群体中的571个感病单株进行分子检测,各单株的电泳带型与双亲进行比较。用 Mapmaker3.0软件进行连锁分析表明,标记 C189和 CP02662位于 Xa23基因的两侧,C189标记靠着丝粒一侧,与 Xa23的遗传距离为0.8 cM,CP02662标记靠端粒一侧,与 Xa23 的遗传距离1.3 cM,从而将 Xa23框在了2.1 cM 范围之内。由于 C189离 Xa23基因很近(0.8 cM),仅利用该标记,就足以达到利用分子标记辅助选择 Xa23打基因之目的。2003年利用 C189分子标记检测了180份株系材料,2004年从中随机选择16个株系的自交种子进行抗病性接种鉴定。结果表明,对于11个 Xa23基因纯合的株系,利用 C189单个分子标记辅助选择 Xa23基因的正确率接近100%;对于5个 Xa23基因杂合株系,后代抗病性接种鉴定也符合预期的1对基因分离(x2≤0.1.P≥0.75),说明 C189检测的 Xa23基因型与实际基因型吻合。利用该技术,我们已选育出抗白叶枯病和抗褐飞虱且农艺性状优良的恢复系3个,这些材料正被用于组配杂交稻。
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