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目的:建立高效液相色谱-荧光检测仪(HPLC-FLD)测定血清中格列喹酮含量的分析方法。方法:色谱条件:色谱柱:Kromasil C18柱(150 mm×4.6 nmm,5μm);流动相:乙腈-[20 mmol/L磷酸二氢钾(pH2.5)含5%乙腈](65:35);荧光检测器:激发波长315 nm,发射波长410nm;柱温:30℃;流速:1.0mL/min;进样量:20μL。样品前处理:取血清样品150μL于1.5mL具塞试管中,分别加入75μL华法林钠储备液,2mol/L,盐酸50μL酸化,加入600μL乙醚-异丙醇(100:5,v/v),漩涡混合3 min,12000 r/min离心5min,取上层有机相。之后,重复该萃取步骤两次,合并有机层,吹干。加300μL乙腈溶解,漩涡混合3 min,12000r/min离心5min,取上清液20μL进样测定。结果及讨论:Fig1为空白血清的HPLC图,由图可见此条件下,内源性物质响应强度较低;Fig2为空白血清中加入华法林钠的HPLC图,其中华法林钠的保留时间为3.1min,且与内源性干扰物有较好的分离。Fig3为向空白血清中加入格列喹酮的HPLC图,保留时间为5.4min。对比后两张图可以看出,华法林钠和格列喹酮有较好的分离,且均不受内源性物质干扰。待测物均在10min之内出峰,分析速度快,适合大批量生物样本的分析。在0.04-10μg/mL浓度与峰面积比值线性关系良好,回归方程:Y=0.5175 X-0.0681(Y:格列喹酮浓度,X:格列喹酮峰面积/内标峰面积),R~2=0.9999。相对回收率范围为85%-103%,日内精密度(RSD)≤2.2%,日间精密度(RSD)≤4.3%。格列喹酮的结构中含有易发射荧光的长共轭基团,因此本方法采用荧光检测器进行格列喹酮含量测定。同时采用结构相近的华法林钠作为内标,保证了同一检测条件下,二者均可获得满意的色谱峰。结果表明,本方法灵敏度高、专属性强、准确度高、分析速度快,适合血清中格列喹酮的高效浓度监测。