芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicae)在分类上属于原生动物界,根肿菌门(Plasmodiophoromycota),是活体专性寄生的土传病原菌,可以危害100多种十字花科植物,引起主根或侧根形成指状、棒状或球形的肿瘤,已经在全球超过60个国家或地区发生危害,造成严重的产量损失。目前,根肿菌不能人工纯培养,也无法进行遗传转化,因而在分子水平的研究极其有限。本研究建立了利用水培法培养油菜,高效收集侵染早期根肿菌游动孢子的方法,以休眠孢子为对照,提取其总蛋白;通过SDS-PAGE电泳,蛋白质胶内酶解以及肽段提取,进行液相串联质谱(liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)分析。质谱数据与根肿菌基因组进行匹配,得到了接种油菜48h后根肿菌特异表达的207个蛋白。根据稻瘟菌及卵菌等病原物预测分泌蛋白方法,对所得蛋白信号肽、跨膜结构域、GPI锚定位点等经过预测分析,结果显示,其中可能的分泌蛋白有11个。同时,结合根肿菌侵染油菜的转录组数据,筛选其中特异表达的分泌蛋白10个进行后续研究。目前已经克隆其中5个分泌蛋白,并对其中两个利用TRV在烟草中进行了外源表达。同时将在油菜中表达相关分泌蛋白编码基因,在获得转基因植株后接种根肿菌,观察其对根肿菌侵染的反应,并进行蛋白细胞定位,寄主互作蛋白筛选等深入研究。