一种改进的重组系统介导的耻垢分支杆菌代谢相关MSMEG6171基因的无痕敲除

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【摘要】

：

<正>目的结核分枝杆菌生长速度慢且体内重组酶活性低,导致突变株的构建需半年之久。本研究意在构建一种适用于结核分枝杆菌快速无痕敲除且易于筛选的同源重组系统。方法野生

【作者】

：

颜慧敏

【机构】

：

广东医科大学;

【发表日期】

：

2004年期

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<正>目的结核分枝杆菌生长速度慢且体内重组酶活性低,导致突变株的构建需半年之久。本研究意在构建一种适用于结核分枝杆菌快速无痕敲除且易于筛选的同源重组系统。方法野生型耻垢分支杆菌转化含有PAg85-lacZ-Phsp60-sacB筛选片段、且能诱导表达两种同源重组酶gp60和gp61的质粒pJV53-lacZ-sacB。分别将MSMEG₆171基因的两个同源臂克隆到含有潮霉素抗标签的重组质粒p1NIL-dif-hyg-dif中,再通过聚合酶链式反应克隆6171up-dif-hyg-dif-6171down片段,电转化入含有质粒pJV53-lacZ-sacB的野生型耻垢分支杆菌中。自身高度保守表达的Xer重组酶切除两个dif

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