基于肝毒性的山豆根水煎液提取工艺的优化

来源 :中国药理学与毒理学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qq330525312
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目的研究山豆根的煎煮工艺,以对其质量进行控制,为研究其肝毒性提供质量稳定可靠的供试品。方法对于苦参碱及氧化苦参碱的HPLC测定进行方法学考察,从线性关系、精密度、稳定性、重现性、加样回收率等方面进行考察。采用正交试验方法,以苦参碱及氧化苦参碱含量为指标,选取单次煎煮时间、加水倍数、煎煮次数为考察因素,通过正交试验对山豆根煎煮工艺进行优化,并运用优化工艺的山豆根水煎液进行动物实验。动物实验灌胃大鼠山豆根水煎液,7 d后检测其ALT,AST,与对照组比较。结果线性关系考察结果确定了苦参碱及氧化苦参碱最低检测线及其标准曲线的回归方程:苦参碱的回归方程:y=15487X-42076(r2=0.999),氧化苦参碱的回归方程:y=12097X-45679(r2=0.999),在5~500μg与峰面积线性关系良好。吸取苦参碱及氧化苦参碱混合标准品(200μg·ml-1)10μl注入色谱仪,连续进样6次,测定峰面积,结果峰面积的RSD为0.83%,表明仪器的精密度良好。取同一份供试品,分别于配制后的0,1,3,6,12,24 h进样,每次10μl,测定并记录峰面积,结果苦参碱峰面积的RSD为1.47%,氧化苦参碱的RSD为1.68%,表明样本24 h内稳定。最后对其加样回收率经行检测:取已知含量的山豆根水煎液0.5 mI(以重现性实验确定样品中的氧化苦参碱含量为0.65%,氧化苦参碱为0.14%)6份,精密称量苦参碱1.3μg及氧化苦参碱0.299μg加入,并加水补充至1 mI,取10μl进样,测定并记录峰面积,结果苦参碱的回收率为98.5%,RSD值为1.74,氧化苦参碱的回收率为98.9%,RSD值为1.32。正交试验:通过各因素对苦参碱和氧化苦参碱提取率的影响顺序为煎煮次数>单次煎煮时间>加水倍数。由于煎煮两次和三次差别不明显,本着节约成本考虑,优选的提取工艺条件为加6倍量水煎煮1 h,共煎煮2次。大鼠毒性实验发现,大鼠灌胃山豆根水煎液7 d的ALT,TBA明显升高,提示该工艺条件下的山豆根水煎液具有肝脏毒性。结论该提取方法的苦参碱和氧化苦参碱提取率高,操作简单、稳定、可行,为山豆根水煎液的肝脏毒性及其物质基础的研究提供了试验依据。
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