目的：建立一种快速稳定可靠的UPLC MS/MS方法用于筛选具有乙酰胆碱酯酶(AChE)及丁酰胆碱酯酶(BChE)抑制活性的化合物. 方法：建立一种测定乙酰胆碱(Ach)和丁酰胆碱(Bch)在酶反应后共有产物胆碱含量的UPLC MS/MS方法,对该方法的方法学进行了方法学验证,对影响酶反应的试验因素(反应温度、反应时间、底物浓度及酶浓度)进行了考察. 结果：建立的方法快速(检测时间1.2min)、灵敏(0.036μM),酶反应的反应温度为25℃、反应时间为20min、酶浓度为0.0035unit/mL(AChE)和0.008unit/mL(BChE)、底物浓度为5.505μM(AChE)和,7.152μM(BChE),并采用该方法对骆驼蓬中分离获得的生物碱化合物进行了活性筛选. 结论：建立了一种快速稳定可靠的UPLC MS/MS方法用于筛选具有乙酰胆碱酯酶(AChE)及丁酰胆碱酯酶(BChE)抑制活性的化合物.