论文部分内容阅读
由于铅的使用越来越广泛,对环境和人群健康的危害越来越大,所以铅污染依然是重大的公共卫生问题。CCM3基因是一种多功能基因,对细胞增殖、分化和凋亡均有重要影响,尤其对维持血脑屏障的正常功能具有重要作用。胚胎发育时期,低浓度铅即可透过血脑屏障进入大脑。因此,研究CCM3基因-环境(铅)交互作用对于低浓度铅暴露所致毒性的影响及其机制具有非常重要的意义。【目的】研究CCM3基因缺陷对醋酸铅暴露所致小鼠胚胎成纤维细胞损伤的影响,探讨CCM3基因与铅暴露的交互作用。【材料和方法】原代分离培养小鼠胚胎成纤维细胞,观察其生物学特性,并建立醋酸铅毒性研究细胞模型;MTS法检测醋酸铅诱导两种基因型小鼠胚胎成纤维细胞的生长抑制情况;双核微核法检测遗传毒性;QRT-PCR法检测线粒体DNA拷贝数,采用JC-1探针法检测线粒体膜电位;探讨CCM3与铅在小鼠胚胎成纤维细胞毒性中的交互作用。【结果】1.成功分离小鼠胚胎成纤维细胞,基因分型后,观察到两种基因型细胞的倍增时间分别是26.35小时,28.06小时。两种基因型细胞的倍增时间差异没有显著性(p>0.05)。2.醋酸铅不同浓度处理能诱导MEF细胞出现增殖抑制效应且CCM3基因与醋酸铅存在交互作用。3.双核微核实验检测结果显示,与对照组相比,醋酸铅处理组细胞双核微核细胞率明显升高,且呈现出明显的剂量依赖性,且CCM3基因与醋酸铅存在交互作用。4.线粒体拷贝数检测结果显示:与对照组相比,随着醋酸铅剂量的升高,线粒体拷贝数先增多后减少,在高剂量组,两种基因型细胞的线粒体拷贝数差异有统计学意义(p<0.05);线粒体膜电位检测结果显示,与对照组相比,PbAc处理组细胞的线粒体膜电位逐渐降低,且呈现剂量依赖性。在线粒体损伤方面,CCM3基因与醋酸铅存在交互作用。【研究结论】CCM3基因缺陷可以影响醋酸铅诱导的小鼠胚胎成纤维细胞增殖抑制、遗传毒性、线粒体损伤,且具有剂量反应和时间效应关系;在小鼠胚胎成纤维细胞的毒性效应方面,醋酸铅和CCM3基因存在交互作用。