[目的]了解广西地区牛源大肠杆菌的耐药性及其相关耐药基因的分布,为以后牛源大肠杆菌的防治提供参考依据。[方法]2017年4月-2018年9月,从广西柳州、桂林、南宁等地区腹泻牛只粪便中进行牛源大肠杆菌的分离,经过回归小鼠验证致病性,获得具有强致病力的致牛腹泻大肠杆菌13株。继而对这些细菌进行了生化特性、血清型鉴定、18种抗菌药物的耐药表型以及主要耐药基因的鉴定分析。[结果]O126为优势血清型(4/13);13株大肠杆菌呈现出多重耐药性,除对土霉素、多西环素、左氧氟沙星和利高霉素不耐药外,对庆大霉素、头孢曲松、卡那霉素、恩诺沙星、替米考星、氟苯尼考、链霉素7种药物的耐药率在7.7%～30.77%之间;对青霉素、泰乐菌素、林可霉素、苯唑西林4种药物的耐药率在53.85%～92.3%之间;对氨苄西林、磺胺嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶的耐药率最高,均为100%。主要以二重耐药(5/13)和三重耐药(5/13)为主,最严重的为五重耐药(1/13)。耐药基因检测结果显示,13株大肠杆菌对喹诺酮类和四环素类抗菌药的耐药基因携带率较高;Gyr A/GyrB/ParC喹诺酮类耐药基因是抗菌药耐药基因中最为流行的基因型,检出率为100%;四环素类TetA (76.92%)的检出率较高,氨基糖苷类耐药基因型aacC2 (53.85%)和aac(3’)-Ⅱa (53.85%)中等检出率;β-内酰胺类耐药基因型bla-OXA (38.46%)和bla-TEM (53.85%)中等检出率;氯霉素类耐药基因型floR (76.92%)的检出率较高;磺胺类耐药基因型SUL1 (76.92%)和SUL2 (100%)的检出率较高。[结论]此次分离到的13株大肠杆菌具有较严重的耐药性,且存在多重耐药现象,提示这些养殖场过度使用抗菌药。应先确诊动物的疾病和致病菌的种类,再合理选择抗菌药进行治疗,尽量选择非广谱、敏感、高效的抗菌药,从而减少耐药性的产生。