【摘 要】
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共轭亚油酸(CLA)是一类由不同位置和几何异构体组成的拥有两个共轭双键的十八碳二烯酸。它广泛存在于多种食物中,具有减肥、抗癌、抗动脉粥状硬化和抗糖尿病等诸多生理活性。
【机 构】
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沈阳农业大学食品学院; 东北农业大学食品学院; 中国海洋大学食品科学与工程学院;
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共轭亚油酸(CLA)是一类由不同位置和几何异构体组成的拥有两个共轭双键的十八碳二烯酸。它广泛存在于多种食物中,具有减肥、抗癌、抗动脉粥状硬化和抗糖尿病等诸多生理活性。为了获得活性CLA高产,本文将突变的亚油酸异构酶克隆到大肠杆菌中表达,在单因素试验基础上采用相应曲面法优化重组大肠杆菌培养条件提高生产亚油酸异构酶的能力,根据响应面法实验结果分析显示,发酵时间、诱导前生物量和LA浓度对重组亚油酸异构酶的表达有显著影响且均为正效应。得到二阶回归方程:Y (μg/mL)=-4550.38+487.34X1+57.45X2+105.78X3+22.18X1X2+33.52X1X3+617.37X2X3-13.38X12-1022.03X22-998.65X32。分析显示模型回归显著,该模型方程R2=0.99273,说明模型的可信度较高,回归方程的拟合程度良好,模型可以解释99.273%的实验所得重组亚油酸异构酶活性的变化,三个影响因素最佳组合为发酵时间19.5h、诱导前生物量OD600=0.47和LA浓度0.57mg/mL,此时预测亚油酸异构酶催化LA转化为CLA最大量为143.33μg/mL。在优化后的诱导培养基成分及诱导参数下进行发酵实验,验证模型预测的准确性,共进行3组重复实验,发酵CLA的产量为141.75±0.14μg/mL,与预测产量相符。通过优化设计,CLA产量从68.3μg/mL提高到141.75±0.14μg/mL,提高了107.5%。
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