蜂蜜中磺胺类抗生素(SAs)残留是蜂蜜检测的重要项目。由于磺胺类抗生素与蜂蜜中的还原糖会发生结合反应,生成磺酰胺基苯糖共轭类物质[1],因此在分析蜂蜜中磺胺类药物时,需要通过酸解步骤,以释放出自由态磺胺类药物,便于检测。目前多数文献中对酸解步骤的优化都是通过添加回收率进行考察[2,3],然而由于短时间内添加磺胺与还原糖不能立刻发生结合,所以该方法并不能真实模拟磺胺在蜂蜜中的赋存状态,即使添加回收率接近100%,也不能证明蜂蜜中与糖结合的磺胺类药物均完全酸解释放。综上,蜂蜜中磺胺类药物测量准确性评价方法的合理性存在问题,测量结果的准确性难以保障。目前还没有相关文献对磺胺类样品在蜂蜜中的结合状态、产物进行系统的研究。有研究表明磺胺噻唑(ST)与葡萄糖会发生脱水结合反应,生成磺酰胺基苯糖共轭类物质,并用荧光法对其定性验证[4],但未提供磺酰胺基苯糖共轭类物质结构及其反应动力学过程相关信息。为了深入了解磺胺药物在蜂蜜中的反应过程及其产物,进一步研究高准确定量分析蜂蜜中磺胺类药物的样品制备与测量方法,本文以磺胺噻唑(ST)和磺胺二甲嘧啶(SM2)及其相应的同位素标记物为例,应用高效液相色谱质谱联用法,对磺酰胺基苯糖共轭类物质进行定性定量研究,基于此研究,开展磺胺类药物与葡萄糖反应动力学研究。结果表明,不同浓度水平的ST、ST-13C6、SM2、SM2-D4、SM2-13C6均会与葡萄糖结合,结合程度随静置时间增加而提高并最终达到平衡。应用高效液相色谱-AB5500 Qtrip质谱中的MRM-EPI组合扫描,对相关共轭类物质进行定性,图1为ST与葡萄糖结合产物及ST自身的二级碎裂图,对比两者的特征碎片离子,以及同位素标记化合物的质谱碎片,证明磺酰胺基苯糖共轭类物质是通过ST(SM2)与葡萄糖发生脱水反应生成。建立了同时检测游离磺胺药物和磺酰胺基苯糖共轭的方法,可以监测样品前处理水解完全程度、或者添加回收率测量过程中的添加药物的结合状态,为从微观上测量结合情况并提高测量准确度提供了新思路。