锌、硒对体外培养猪脾脏淋巴细胞增殖及分泌功能的影响

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本试验旨在探讨硫酸锌(ZnSO;)、甘氨酸锌(Glycine zinc,ZnGly)、亚硒酸钠(Na2SeO3)和硒代蛋氨酸(Selenomethionine,SeMet)对猪脾脏淋巴细胞体外增殖和分泌功能的影响;试验采用CCK-8法检测4种物质对淋巴细胞增殖的影响,筛选出最佳锌源和硒源以及其最佳合适剂量;采用ELISA法检测最佳锌源、硒源在合适剂量下对淋巴细胞分泌IL-2、IL-4和IL-10的影响,初步研究4种药物作用淋巴细胞的机制。试验选用28日龄健康的断奶仔猪,无菌取脾脏,制备单细胞悬液,用淋巴细胞分离液分离出淋巴细胞,进行细胞计数,台盼蓝拒染试验,细胞活力大于95%,调整淋巴细胞的浓度为2×106个/mL;设置的锌硒浓度梯度:ZnSO4和ZnGly分别为10、20、40及80μmol/L;Na2SeO3和SeMet分别为0.005、0.01、0.05、0.1、0.5、1、5及10μmol/L;试验分组如下:分别为ZnSO4组、ZnSO4+拌刀豆蛋白(ConA)组、ZnSO4+脂多糖(LPS)组和ZnSO4+环磷酰胺(CY)组,另设ConA和LPS对照组;ZnGly分组同ZnSO4;Na2SeO3组、Na2SeO3+ConA组、Na2SeO3+LPS组和Na2SeO3+CY组;SeMet分组同Na2SeO3;每个剂量3个重复。试验中ConA的终浓度为5μg/mL,LPS的终浓度为10μg/mL,CY的终浓度为100μg/mL。在450 nm处检测吸光度值,根据所得结果设置ZnGly和SeMet复配组。分组同上。通过淋巴细胞增殖试验筛选出合适的锌源和硒源及其最适浓度,进行细胞因子的检测。淋巴细胞的制备同上,调整细胞的浓度为5×106个/mL。筛选出的ZnGly和SeMet,浓度分别为ZnGly:20和40μmol/L;SeMet:0.1和0.5μmol/L;二者的复配分别为20×0.1、20×0.5、40×0.1和40×0.5μmol/L。分别设置ZnGly组、ZnGly+ConA组、SeMet组、SeMet+ConA组、ZnGly+SeMet组、ZnGly+SeMet+ConA组和对照组,每个剂量3个重复。在CO2培养箱培养48 h,完后取出培养板离心取上清液,按ELISA试剂盒说明书检测IL-2、IL-4和IL-10。结果显示:ZnGly单独作用能促进猪脾脏淋巴细胞增殖(P<0.05),在40μmol/L时效果最佳(P<0.05),与ConA协同时作用不显著(P>0.05),ZnGly在40μmol/L时能显著缓解CY造成的抑制(P<0.05);ZnSO4不管单独作用或是协同ConA或LPS作用效果都不显著(P>0.05)。SeMet在0.1和0.5μmol/L时能显著促进猪脾脏淋巴细胞增殖(P<0.05)。ZnGly和SeMet的复配组在40(ZnGly)×0.5(SeMet)时对淋巴细胞的增殖效果最佳(P<0.05)。ZnGly能促进IL-10的分泌(P<0.05)。SeMet能促进猪脾脏淋巴细胞分泌IL-2和IL-10(P<0.05)。综合比较发现,甘氨酸锌和硒代蛋氨酸能显著促进淋巴细胞增殖和促进IL-2和IL-10的分泌。ZnGly在40μmol/L时作用效果最好,SeMet在0.5μmol/L时作用效果最好。甘氨酸锌和硒代蛋氨酸具有互作作用。甘氨酸锌和硒代蛋氨酸可以通过调节Th1/Th2平衡来调节细胞免疫功能。
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