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对生防菌定殖的追踪和监测对研究生防菌的生防机制至关重要,很久以来,抗生素标记成为人们常用的手段,可是这种方法却不易区别环境中对标记抗生素有同样抗性的土著微生物,而且使用选择平板法并不能明确细菌在根周围小生境的空间分布。标记基因技术的建立与发展,为生防细菌定殖的微生态学研究提供了有效手段。其中绿色荧光蛋白(GFP)因为荧光性能稳定、检测方便以及表达不受受体种属限制等特性,而越来越为人们重视,并被成功地用于研究细菌在植物根部的定殖。青枯病生防菌ANTI-8098A(Bacillus cereus strain ANTI-8098A),属蜡状芽孢杆菌,由本实验室自番茄植株根际土壤分离获得,对不同作物的青枯雷尔氏菌具有较强的抑菌作用,对青枯病具有较好的防效,但是目前未见关于青枯病生防菌gfp基因标记方面的报道。本实验主要通过比较不同质粒含量和不同感受态细胞浓度对ANTI-8098A电击转化效率的影响,优化ANTI-8098A的电击条件,获得gfp基因稳定标记的青枯病生防菌,并研究了标记的青枯病生防菌的生理生化特性及其对不同作物分离的青枯雷尔氏菌的抑菌作用,为进行生防菌的定殖和植物根际有益微生物的个体生态学提供实验参数。采用质粒pCM20进行青枯病生防菌蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus,ANTI-8098A)的电击转化,对电击转化条件的优化结果表明,当电击条件为2.5KV,200Ω,25μF时,为转化的最佳条件质粒DNA含量118ng,感受态细胞浓度为1.14×108CFU/mL。转化子ANTI-8098A:pCM20在无红霉素选择压力的LB培养基转接16次后,绿色荧光的表达仍为100%。对其生长曲线的测定结果表明,青枯病生防菌ANTI-8098A的生长速度和ANTI-8098A:pCM20基本一致。不同培养温度和培养转速对ANTI-8098A:pCM20生长的影响较大,当培养温度为35℃时,ANTI-8098A:pCM20的含量为60.0×108CFU/mL,当培养转速为250r/min时,ANTI-8098A:pCM20的含菌量为50.33×108CFU/mL。青枯病生防菌ANTI8098A:pCM20和ANTI8098A对不同作物分离的青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)具有明显的抑制作用,抑菌效果无显著差异。