【摘 要】
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目的构建针对人TGF-β1基因的shRNA表达载体并检测其在人脐静脉内皮细胞株中对TGF-β1基因的抑制作用,以用于后续的RNAi研究。方法利用生物信息学方法设计shRNA,在人TGF-β1
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目的构建针对人TGF-β1基因的shRNA表达载体并检测其在人脐静脉内皮细胞株中对TGF-β1基因的抑制作用,以用于后续的RNAi研究。方法利用生物信息学方法设计shRNA,在人TGF-β1基因的mRNA序列中选择靶序列,设计并合成编码的shRNA的两条寡核苷酸序列,经退火成互补双链,再克隆至PGenesil-1质粒。构建2个重组体PGenesil-TGF-β1-1(pTGFB11)和PGenesil-TGF-β1-2(pTGFB12),酶切及测序证实后转染至人脐静脉内皮细胞株(ECV304)中,错构载体(pHK)为阴性对照。转染后采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测TGF-β1mRNA表达水平。结果酶切及测序证实表达载体pTGFB11、pTGFB12构建成功,两个重组体的转染率为38.2%和40.1%。两个表达载体均明显下调人脐静脉内皮细胞株TGF-β1基因的转录。结论成功构建的针对人TGF-β1基因的shRNA表达载体对脐静脉内皮细胞株TGF-β1基因的转录有明显的抑制作用,为后续移植肾肾病基因治疗的研究奠定了基础。
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