禾谷镰刀菌剪接体蛋白FgPrp6与蛋白激酶FgPrp4的关系研究

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剪接体蛋白Prp6是三聚体U4/U6.U5的重要组分。在人类细胞和裂殖酵母中,Prp6为蛋白激酶Prp4磷酸化,且这个过程对剪接复合体B的形成很重要。笔者课题组在研究禾谷镰刀菌蛋白激酶功能时发现,FgPrp6上的突变部分恢复Fgprp4突变体的表型。为了研究禾谷镰刀菌中Prp6与Prp4激酶的关系,笔者进一步鉴定了FgPrp6上的10个可以恢复Fgprp4突变体的表型的突变位点,这些位点都位于与裂殖酵母或人类细胞Prp6上保守的Prp4磷酸化位点附近,表明突变对FgPrp6功能的影响与FgPrp4磷酸化相似。为了研究FgPrp6上保守磷酸化位点的功能,我们构建了阻止磷酸化突变菌株Fgprp6/FgPRP6T199A&T200A、Fgprp6/FgPRP6T219A&T221A、Fgprp6/FgPR6T261A、Fgprp6/FgPRP6T252A、Fgprp6/FgPRP6△199-221和Fgprp6/FgPR6△250-262。对这些菌株进行表型分析发现它们的菌落形态、生长速率以及有性生长过程中的子囊壳、子囊孢子数量和形态均与野生型相似。但是Fgprp6/FgPRP6T199A&T200A、Fgprp6/FgPRP6T219A&T221A、Fgprp6/FgPRP6T261A、Fgprp6/FgPRP6△199-221和Fgprp6/FgPRP6△250-262菌株在小麦胚芽鞘和玉米须上的致病力下降;而Fgprp6/FgPRP6T252A菌株致病力下降不明显,表明T199、T200、T219、T221、T261五个位点对FgPrp6的功能重要。为了明确T199、T200、T219、T221、T261位点也为FgPrp4磷酸化,笔者构建了模拟磷酸化菌株Fgprp4/FgPRP6T199D&T200D、Fgprp4/FgPRP6T219D&T221D和Fgprp4/FgPRP6T261D,笔者将通过观察这些菌株的表型来判断T199、T200、T219、T221、T261位点是否为FgPrp4磷酸化。
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