【摘 要】
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乳铁蛋白(LF)摄入后将经过胃肠道中酶的分解,这些分解产物的促成骨细胞增殖活性目前未见报导。本文利用模拟胃液对LF处理不同时间,经阳离子交换层析和凝胶过滤层析对乳铁蛋白
【机 构】
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哈尔滨工业大学化工学院食品科学与工程系;
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乳铁蛋白(LF)摄入后将经过胃肠道中酶的分解,这些分解产物的促成骨细胞增殖活性目前未见报导。本文利用模拟胃液对LF处理不同时间,经阳离子交换层析和凝胶过滤层析对乳铁蛋白肽进行分离纯化,采用MTT法跟踪检测促成骨细胞增殖活性,逐级筛选出活性强的多肽并进行氨基酸序列测定。结果表明:随着水解时间的延长,LF逐渐被水解成小分子量肽段,90min之后水解产物趋于不变,分子量约为5kD,且H5能显著促进成骨细胞增殖。利用阳离子柱SP Sepharose Fast Flow(1.6×10cm)进行分离,洗脱液为pH7.4 0.05M PBS缓冲液,洗脱流速为3 mL/min,得到5个峰,峰5具有较好促成骨细胞增殖活性。将峰5过凝胶层析柱Superdex Peptide10/300GL(1.0×30cm),洗脱液为pH7.6 0.02M PBS缓冲液,洗脱流速为0.5mL/min,得到2个峰,峰5-1具有较好促成骨细胞增殖活性。利用Tricine-SDS-PAGE确定峰5-1含两种组分,分子量为9.35kD和6.95 kD,经序列鉴定分析可推测分别为LF分子中29~116AA和244~307AA的肽段。本实验说明LF经过适当的胃液条件消化后仍具有一定的促成骨细胞增殖的活性,该研究为LF相关功能性产品开发奠定了基础。
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