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目的低温保存是低温生物学研究中的一项重要技术,近年来的迅速发展为临床医学带来了许多突破性的进展,现在速冻玻璃化已被认为是大多数生物组织低温下保存的最佳方法,但是如何进一步提高储存皮肤的活力,却一直没有得到非常满意的答案,其关键在于解决低温的损伤作用。已有学者认为组织低温保存后产生的效应包括细胞间和细胞质内部的改变,而且这些转变均可被细胞骨架系统所介导。但是,对于皮肤细胞骨架蛋白低温干预荆的相关保护性研究尚少。众所周知,皮肤的功能高度依赖于表皮的细胞骨架结构,任何损坏或使其功能降低的生物学行为将导致皮肤活力下降。本实验研究联合应用非渗透性低温保护剂海藻糖二甲基亚砜,用于人类皮肤的低温储存,并与皮库常规应用的二甲基亚砜、丙二醇、DMEM进行比较,以寻求更佳的皮肤冷冻保护剂。方法实验将新鲜成人皮肤分为4组,分别经海藻糖／二甲基亚砜(T／D)、二甲基亚砜／丙二醇(DiP)、二甲基亚砜／去血清角质细胞培养液(D／K)、DMEM作为低温保护剂保存, -196℃液氮冻存7天、14天复温,设新鲜皮肤为对照组。采用组织病理形态学(H．E．染色、免疫组织化学染色和透射电镜)、琥珀酸脱氢酶(SDH)测定及氧耗量测定方法,对各组间皮肤活力进行比较。并在此基础上,进一步采用RT-PCR方法对不同低温保护剂保存后皮肤的β-actin基因水平进行了深入的研究。结果通过光镜图象观察和蛋白分析结果说明,0．5M海藻糖／二甲基亚砜能够很好的对皮肤组织细胞骨架结构、骨架蛋白cytoskeratin<AE3>和β-actin发挥低温保护作用,其中β-actin的基因表达量与新鲜皮肤组相似。此外,皮肤活力的测定表明,海藻糖／二甲基亚砜组具有提高低温保存皮肤活力的作用,并优于传统保护剂组。结论海藻糖与二甲基亚砜联合应用是较佳的冷冻保护剂,皮库在常规应用保护剂时可以在渗透性保护剂中加入海藻糖。