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MicroRNAs(rniRNAs)是一类长约21-24碱基的非编码单链小分子RNA,它们主要通过对mRNA的切割、降解和翻译抑制对靶基因进行转录后调控,参与调控多种生物途径,涉及生物的生长发育以及对外界生物和非生物胁迫的应答。在拟南芥中,miRNA经PolⅡ转录产生前体pri-miRNA,pri-miRNA经过DCL1,HYL1和SE等组成的miRNA加工复合体的切割产生含有发夹结构的pre-miRNA,进一步加工为成熟的miRNA。在植物体内,HYPONASTIC LEAVES1(HYL1)是一个含有两个dsRBD结构域的双链RNA结合蛋白。HYL1通过辅助DCL1促进前体miRNA的加工。最近的一些研究表明HYL1的生物活性受到磷酸化修饰的影响,而且COP1通过光途径可以调控HYL1的蛋白稳定性。但是HYL1的磷酸化水平的动态调控是否和其蛋白稳定性存在相关性仍不清楚。在研究中,我们首次发现PP4(Protein Phosphatase 4)和SMEK1(Suppressor of MEK 1)作为MEK的负调控因子,通过抑制MPK3对HYL1的磷酸化水平增加了HYL1蛋白稳定性。而拟南芥SMEK1蛋白的功能缺失导致了植物的多效表型,发育存在明显缺陷。在smek1突变体中,HYL1蛋白水平明显下调,并呈现出mature miRNAs的整体下调。通过激酶抑制剂或磷酸酶抑制剂可以增加或减少HYL1的稳定性。体外激酶实验表明SMEK1抑制MPK3激酶对HYL1的磷酸化作用,这证明SMEK1作为MAPK途径的抑制剂抑制HYL1蛋白的磷酸化水平而促进其稳定性。进一步实验发现SMEK1作为调节亚基通过组装催化亚基PPX1/2形成有功能的PP4复合体而发挥功能。此外,ABA作为外界信号能够通过诱导SMEK1的蛋白水平来抑制被ABA激活的MPK活性来实现稳态。总之,我们的研究结果为研究激酶和磷酸酶在miRNA产生过程中的动态调控提供了一个关键的线索。