目的:收集DMD患者尿液细胞并诱导成病人特异性iPS细胞,在体外将Minidystrophin基因定点整合至细胞核糖体基因区中,得到正常表达Mini-dystrophin蛋白的iPS细胞系。方法:利用逆转录病毒介导的转染系统将四种经典转录因子Oct4,Sox2,c-Myc和Klf4导入DMD患者尿液中(DU)分离出的肾近端小管上皮细胞,并且在诱导过程中添加小分子Vc和VPA。通过细胞形态学、碱性磷酸酶染色、干细胞表面多潜能标志物染色及细胞核型检测对传代后的克隆进行鉴定,随后在裸鼠体内形成畸胎瘤检测其随机向三个胚层分化的能力。同时,构建携带Mini-dystrophin治疗基因的以CAG为启动子的新型非病毒核糖体基因区打靶载体pHrn-CDysG,联合转录激活因子样效应物核酸酶(TALENs)通过核转将Mi ni-dystrophin基因定点整合至iPS细胞核糖体基因区中,经PCR和southern blot筛选定点整合细胞克隆。结果:本研究通过细胞形态学、免疫荧光标记及干细胞多能性检测等证明成功获得DMD病人特异性ips细胞。通过PCR和southern blot筛选得到Minidystrophi n定点整合的细胞克隆。讨论:将Mi ni-dystrophin基因定点整合至DMD病人特异性ips细胞核糖体基因区基因组中,为筛选稳定表达Mini-dystrophin蛋白的iPS细胞克隆奠定了基础,也为采用exvivo(间接体内)途径进行DMD患者自体基因治疗开辟一条新的思路。