乳糖替代IPTG诱导重组融合蛋白猪CCK39/UreB在大肠杆菌的表达

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在前期研究中我们已成功构建基因工程菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET43a(+)/CCK39/UreB,原核表达猪胆囊收缩素(CCK)39亚基,以及猪肠道细菌脲酶B亚基(UreB)融合蛋白,旨在通过制备一种疫苗,免疫蛋鸡后制备一种抗猪CCK/脲酶卵黄抗体饲料添加剂,既能提高猪只采食量,又能减少氨的产生,改善养殖环境,提高蛋白利用率。本研究以乳糖为诱导剂,采用SDS-PAGE和BandScan凝胶分析软件比较分析了诱导时间、诱导剂终浓度、诱导温度、诱导前菌体浓度、氨苄青霉素浓度、培养基起始pH值等因素对融合蛋白表达量的影响,并在这个基础上实现了5L发酵罐放大培养。结果表明,对诱导表达条件进行优化后,乳糖诱导重组融合蛋白CCK39/UreB的表达率最高可达41.8%,达到IPTG的诱导水平;较低的诱导温度能显著提高可溶性融合蛋白的表达水平;在5L发酵罐培养中,融合蛋白表达率和细胞干重的最大值分别可达37.8%和15.37g/L。研究结果为乳糖替代IPTG大规模生产CCK/UreB融合蛋白奠定基础。
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