【摘 要】
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目的:比较实时荧光定量PCR与RT-PCR检测粪肠球菌毒力因子esp,评价实时荧光定量PCR技术测定粪肠球菌RNA水平的价值。方法:提取粪肠球菌标准株临床样本总RNA,进行总RNA的DNA酶
【机 构】
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大连医科大学口腔医学院口腔内科学教研室;
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目的:比较实时荧光定量PCR与RT-PCR检测粪肠球菌毒力因子esp,评价实时荧光定量PCR技术测定粪肠球菌RNA水平的价值。方法:提取粪肠球菌标准株临床样本总RNA,进行总RNA的DNA酶处理,通过逆转录聚合酶链反应得到cDNA。采用实时荧光定量PCR及普通RT-PCR检测粪肠球菌esp基因的差异。结果:常规RT-PCR检测可见有阳性扩增条带的最大稀释度为1:1 03,敏感度是750pg/ul。SYBR GreenⅠ染料法荧光定量PCR在对数稀释为1:105仍有阳性扩增曲线,敏感度是7.5pg/ul,敏感度下限是常规RT-PCR的100倍。结论:用普通的RT-PCR及实时荧光定量PCR都可对粪肠球菌mRNA进行定量检测。对于粪肠球菌毒力因子esp的检测,实时荧光定量PCR法的灵敏度比普通的两步法RT-PCR高100倍。
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