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AGO(Argonaute)是一类高度保守的蛋白家族,通过与small RNAs形成沉默复合体参与植物转录水平和转录后水平的基因沉默,对基因沉默和植物抗病性起重要调控作用。AGO1是AGO蛋白家族的基础成员。本研究通过构建amiRNA(artificial microRNAs)载体,旨在对4GO1基因进行特异性沉默,并分析amiRNA对AGO1基因的沉默效果。利用WMD(Web microRNA designer)平台和http://benthgenome.qut.edu.au/网站设计针对AGO1的amiRNA序列,利用PCR技术扩增拟南芥miR159b前体序列,构建特异性沉默AGO1的amiRNA重组载体。本研究以模式植物本氏烟草(Nicotiana benthamiana)为研究材料,利用含有amiRNA重组载体的农杆菌介导法侵染本氏烟草叶片,分别在2d,5d,10d,15d收集侵染叶片。利用RT-qPCR分析4GO1基因的表达量。结果表明,2d,5d收集的侵染叶片AGO1基因的表达量基本没有变化,10d时3个amiRNAs对AGO1基因的沉默效率分别达到了75.2%,61.5%,9.O%,15d时沉默效率不如侵染10d显著。由此我们得出结论10d时人工构建的miRNA在本氏烟草中成功表达,实现了对靶基因的切割,达到了对4GO1基因沉默的效果。为后期探索AGO1对植物抗病效果的研究奠定了基础。