薄层色谱-高效液相色谱法检测猪可食性组织中氟苯尼考的总残留物

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[目的]氟苯尼考结合残留物在猪可食性组织中的蓄积威胁食品安全,影响养猪业的可持续发展。已报道的检测方法以色-质联用技术为主,且绝大多数不能检测氟苯尼考的结合残留物。本研究建立了一种猪可食性组织中氟苯尼考总残留物(以氟苯尼考胺计算)的薄层色谱-高效液相色谱法。[方法]均质的组织样品经过强酸水解以释放氟苯尼考结合残留物,同时将氟苯尼考及所有代谢物转化为氟苯尼考胺。组织水解物经冷却后以乙酸乙酯洗涤去除部分杂质。洗涤后的样品调节pH至碱性,然后以乙酸乙酯提取。于提取液(乙酸乙酯层)中加入适量冰乙酸溶液,并在50℃下空气流挥干乙酸乙酯。剩余的冰乙酸溶液经过正己烷脱脂和再次浓缩后以薄层色谱净化。薄层展开剂为乙酸乙酯-丙酮-氨水(2:8:0.5,v/v/v)。净化后的样品在Waters Symmetry C18柱上以乙腈-磷酸盐缓冲液混合物(33.3:66.7,v/v)作为流动相进行分离,在225 nm检测。[结果]空白组织样品的色谱图中氟苯尼考胺保留时间附近未见杂质干扰,说明方法特异性良好;在0.0625-8μg/mL的浓度范围内氟苯尼考胺的浓度与峰面积呈现良好的线性关系,回归方程为y=282116x+9413.7,相关系数大于0.999;方法检测猪肌肉、肝脏、肾脏中氟苯尼考总残留物的最低检测限均为20μg/kg,最低定量限分别为40、50、40μg/kg;CCα分别为319.29、2060.03、526.96μg/kg,CCβ分别为340.29、2186.69、575.05μg/kg;方法检测猪肌肉、肝脏、肾脏中氟苯尼考胺的回收率分别为84.38%-109.47%、80.78%-94.02%和83.08%-98.64%,日间相对标准偏差≤8.99%,日内相对标准偏差≤11.27%。[结论]方法各项指标均符合欧盟2002/657/EC决议的要求,且检测成本低廉,特别适用于基层检测机构日常对猪可食性组织中氟苯尼考进行残留监控;方法以薄层色谱作为样品净化的手段,有效地去除了组织水解物中共存的内源性干扰物,确保了良好的特异性;方法将薄层色谱与高效液相色谱结合,有望弥补高效液相色谱在特异性上的不足,拓宽高效液相色谱在兽药残留分析中的应用。
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