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目的检测Lonp1蛋白在食管癌组织和细胞中的表达情况,研究Lonp1蛋白对食管癌细胞侵袭,迁移,增殖等恶性表型的影响,进一步探索Lonp1蛋白在食管癌中的作用机制。方法利用生物学信息库检索Lonp1蛋白,对其进行生物信息学分析。免疫组织化学染色方法检测食管癌配对的75例的组织芯片(上海芯超生物科技有限公司)中癌和癌旁的Lonp1蛋白表达情况。Western blot实验检测食管癌细胞中Lonp1蛋白的表达情况,检测不同食管癌细胞株Lonp1蛋白的表达量。Primer 5.0软件设计Lonp1蛋白的引物,同时进行引物特异性验证。RT-PCR检测食管癌细胞系中Lonp1的mRNA的表达量。进行食管癌组织的RNA抽提,通过RT-PCR检测癌和癌旁Lonp1蛋白的表达量。选取高表达Lonp1蛋白的细胞株YES2和KYSE150,利用RNAi技术进行敲降实验。Transwell实验和集落形成实验分别检测敲降Lonp1蛋白对食管癌细胞侵袭,迁移和增殖的能力的影响。选取低表达Lonp1蛋白细胞细胞株KYSE30和KYSE450利用质粒转染进行过表达实验。Transwell实验和集落形成实验分别检测过表达Lonp1蛋白对食管癌细胞侵袭,迁移和增殖能力影响。Western blot实验检测Lonp1蛋白对PI3K/AKT通路和EMT途径的影响。进行天然小分子药物筛选,发现天然茶叶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯不仅对食管癌细胞有明显抑制作用,而且还对Lonp1蛋白存在着影响。结果食管癌组织芯片统计75例ESCC样本中Lonp1阳性表达的百分比为88%(66/75),Lonp1阴性百分比12%(9/75)。Lonp1蛋白表达量癌明显高于癌旁。Lonp1蛋白在食管癌细胞系表达量明显高于永生化食管上皮细胞株。RNAi干扰处理后YES2和KYSE150细胞株Lonp1蛋白的表达量明显低于对照NC组。同时,与NC对照组相比,敲降组YES2和KYSE150细胞的侵袭,迁移和集落形成能力明显下降(P<0.05)。质粒过表达KYSE30和KYSE450细株胞后Lonp1蛋白的表达量明显高于空载组。同时,与空载对照组相比,过表达组KYSE30和KYSE450细胞的侵袭、迁移和集落形成能力明显增加(P<0.05)。食管癌细胞YES2和KYSE150中敲降Lonp1蛋白,PI3K和磷酸化Ser473位点AKT蛋白表达明显降低。食管癌细胞KYSE30和KYSE450中过表达Lonp1蛋白,N-cadherin,Vimentin蛋白表达量增加,E-cadherin蛋白表达量降低。通过小分子药物筛选发现天然茶叶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)浓度增加食管癌细胞株KYSE150的Lonp1蛋白表达量降低。结论Lonp1蛋白在食管癌组织和细胞系中均高表达,Lonp1蛋白的表达量与患者的TNM分期及淋巴转移情况存在明显相关性。敲降Lonp1蛋白可有效抑制食管癌细胞的侵袭,迁移和集落形成能力。过表达Lonp1蛋白可明显增强食管癌细胞的侵袭,迁移和集落形成能力。敲降Lonp1蛋白可以抑制PI3K/AKT信号通路。过表达Lonp1蛋白促进了食管癌上皮细胞-间充质转化(EMT)途径。表没食子儿茶素没食子酸酯可以抑制食管癌增殖并且诱导其凋亡。Lonp1蛋白表达量随着表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)浓度增加逐渐降低。图15;表2;参考文献60篇