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目的利用具有蛋白自剪切功能的内含肽pTWIN1原核表达系统对抗菌肽LF-6进行重组表达及制备,探讨制备产物对染菌小鼠的免疫保护作用。方法构建pTWIN1-LF-6-intein2-CBD重组表达载体,筛选重组菌株BL21(DE3)-pTWIN1-LF-6-intein2-CBD并对诱导表达条件优化;在优化条件下扩大培养规模,可溶融合蛋白上清依次通过CBD亲和层析、SephadexG-10分子筛层析和RP-HPLC制备抗菌肽LF-6,并对制备的产物进行质谱验证与体外抑菌活性检测。染菌小鼠免疫保护试验分为对照组(NC),染菌组(MD),低剂量抗菌肽组(LDL),高剂量抗菌肽组(HDL),低剂量抗菌肽染菌组(LDLE)和高剂量抗菌肽染菌组(HDLE);NC、MD组小鼠连续腹腔注射生理盐水5d,其余各组腹腔注射LF-6第5天注射抗菌肽1h后,NC、LD-LF-6、HD-LF-6组小鼠腹腔注射生理盐水,其余各组腹腔注射5×10~8CFU的E.coli k88,24h后取样。结果利用内含肽系统成功表达抗菌肽LF-6,表达量为2mg/L;质谱分析结果表明重组LF-6的分子量为2900.57Da,与理论值一致。体外抑菌试验表明,制备获得的LF-6与化学合成的LF-6对E.coli k88的MIC值分别为5μg/mL和4μg/mL。将制备获得的LF-6用于动物实验,结果表明MD组小鼠回肠TNF-α的表达水平和sIgA分泌量显著高于其它各组(P<0.05);LDLE组和HDLE组小鼠肝、肠系膜、盲肠内容物的大肠杆菌数与MD组相比显著降低(P<0.05),且呈剂量效应;MD组和LDLE组盲肠益生菌数与其它各组相比显著降低(P<0.05),而HDLE组接近NC组水平;染菌组小鼠脾脏T、B淋巴细胞转化率与其它各组相比显著增加(P<0.05),LDLE组和HDLE组MCP-1、IL-1、IL-2、IL-6表达比MD组显著降低(P<0.05)。结论利用内含肽系统能高效表达并制备获得具有活性的抗菌肽LF-6,其与化学合成肽有相近的抑菌活性;重组表达LF-6能够通过提高小鼠淋巴细胞活性、抑制促炎因子表达、维持肠道菌群平衡等途径提高小鼠对细菌感染的抵抗力。