为建立传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)灭活快速检验方法,根据ISKNV感染CPB细胞系转录谱结果,经qRT-PCR验证选择ORF099作为病毒灭活快速检测的靶标基因。从建立的标准曲线可知最低检测限为3拷贝/μL,组间和组内变异系数均小于2%,表明该方法具有较高的灵敏度和较好的重复性。将ISKNV病毒悬液稀释成100~103个拷贝/mL接种细胞,采用qRT-PCR方法检测ORF099基因转录本,第7天即可从接种1个拷贝病毒的细胞中检测出ISKNV ORF099转录本。采用上述病毒灭活快速检验方法对制备的甲醛灭活模拟样品和疫苗样品进行检测。0.05%、0.1%甲醛灭活模拟样品可检测到ISKNV ORF099基因转录本,0.2%甲醛未检测到。0.1%终浓度甲醛灭活ISKNV接种细胞盲传三代未出现CPE,样品接种鱼体后无临床发病症状和试验鱼死亡,表明本研究建立的病毒灭活快速检验方法比细胞盲传法和鱼体安全试验具有更高的灵敏度。本研究方法与传统检测方法相比具有灵敏度高、耗时短、检测效率高等优点,对提高ISKNV灭活疫苗生产效率具有重要意义。