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目的:建立重组细胞中鼠细小病毒检测的NB324K感染试验及实时荧光定量PCR检测方法,并分别进行了方法学分析。方法:将不同稀释度的MMV悬液分别感染NB324K细胞,通过观察细胞病变和结晶紫染色结果检测NB324K感染法的灵敏度。通过设计合成针对非编码区保守序列的一对引物和探针,并优化荧光PCR反应体系和反应条件,建立用于重组细胞中鼠细小病毒检测的荧光定量PCR方法,并对方法的特异性、线性、精密度、灵敏度等指标以及试验干扰性和可行性进行了分析。将NB324K感染试验与荧光定量PCR试验相结合,初步建立NB324K感染PCR试验,并比较该试验方法与NB324K感染法的检测灵敏度及检测时间。结果:建立了NB324K感染试验,该试验的检测灵敏度为0.2CCID50,感染时间为144小时。建立并优化了鼠细小病毒的荧光定量PCR检测方法,该方法特异性较好,与其他种属的细小病毒无明显的交叉反应,线性范围为109-105拷贝数/反应,R2达到0.99以上,灵敏度为5×104拷贝数/反应,试验内和试验间的Ct的精密度均<5%,试验内病毒拷贝数的精密度20%～30%,试验间为20%～50%。通过检测鼠细小病毒感染CHO-K1的模型,证实该方法能够用于细胞样品中鼠细小病毒的检测。对样品进行干扰试验分析结果显示,部分样品存在病毒检测的干扰反应。将该方法与NB324K感染试验相结合,建立了NB324K感染PCR试验,检测灵敏度为0.02CCID50,感染时间为96小时。结论:本研究建立的鼠细小病毒的NB324K感染试验和荧光定量PCR检测方法能够较好的应用于重组细胞中鼠细小病毒的检测,初步建立NB324K感染PCR试验,进一步提高了感染试验的灵敏度并缩短了试验时间。