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马铃薯卷叶病毒（Potato leafroll virus,PLRV）是常见的马铃薯病毒病病原,PLRV基因组有8个ORF,其中ORF5全长1 527bp,编码508个氨基酸组成的蛋白为通读蛋白（Read Through Protein）,研究表明PLRV在宿主细胞或蚜虫体内复制时才需释放RT蛋白,并且凸出于病毒粒体表面,是蚜虫识别因子。为体外表达RT蛋白及抗血清制备,本研究通过TRIzol试剂提取含有PLRV马铃薯叶片的总RNA,反转录合成体外第一条链,设计引物:PLRV RT-Up:AATAATAATCATATGGTAGACTCCGGATCAGAG（下划线为酶切位点:NdeⅠ）;PLRV RT-Down:AATAATAATTCTAGATCATTTCCTCCCTTGGAA （下划线为酶切位点:XbaⅠ）,PCR克隆出PLRV RT基因。经过序列分析,发现含有4个对于原核表达体系使用频率低于20%的稀有密码子CUA,在不改变PLRV RT蛋白质编码的前提下,对序列中的密码子进行改造,重新合成PLRVRT基因,使其偏好原核表达。构建pCzn1-PLRV RT重组表达载体,转化Top10感受态细胞,验证成功后,pCzn1-PLRV RT重组表达载体转入化BL21 （Plyss）表达感受态细胞,扩大培养,经IPTG诱导后,表达出PLRV RT蛋白,采用Ni2+离子亲和层析柱纯化出PLRV RT蛋白,并通过Western Blot方法鉴定。PLRV RT蛋白免疫8周龄雌性昆明小鼠,采用肌内和腹腔注射,10d免疫1次,每次每只免疫200ng目的蛋白;首次免疫时,目的蛋白与弗氏完全佐剂等比例充分乳化,后3次免疫,目的蛋白与弗氏不完全佐剂等比例充分乳化;免疫4次后,采集抗血清。通过间接ELISA方法,确定抗血清识别重组蛋白效价为64 000倍,识别天然病毒效价为32 000倍。特异性分析表明,制备的抗血清能够识别来自3个不同地区的PLRV （吉林省公主岭市、黑龙江省克山县和内蒙古自治区扎兰屯市）,并且不识别马铃薯Y病毒、马铃薯M病毒和马铃薯S病毒。PLRV RT蛋白原核表达的成功,表明在多种马铃薯病毒共同侵染植株造成单一病毒纯化难度较大的情况下,通过基因工程方法来表达出病毒的功能蛋白是一种快捷有效的手段。PLRV RT蛋白抗血清的制备,为PLRV RT蛋白的功能研究奠定了基础,为PLRV的检测提供了技术支持,对马铃薯脱毒种薯种苗的质量提供了保障。