孢子丝菌T-DNA插入突变体及其铜转运蛋白基因的功能研究

来源 :2012年中国菌物学会学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:abubob
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  申克孢子丝菌在环境中广泛存在,是土壤、木材和植物的腐生菌,常可引起人和动物的皮肤孢子丝菌病,严重时可播散至内脏引起全身播散型感染。从分子水平研究申克孢子丝菌的基因功能,有助于揭示其病原学特征和致病机制。利用分子标签获得突变体是进行基因功能研究的有效手段。根癌农杆菌介导的T-DNA插入突变技术(ATMT)具有转化受体类别多、转化效率高、突变体遗传稳定、操作简单等优点而被广泛应用于丝状真菌基因功能的研究。本研究将该技术用于申克孢子丝菌的研究,优化了孢子悬液浓度、农杆菌的诱导时间以及共培养介质等影响转化效率的因素,提高了T-DNA的转化效率,建立了申克孢子丝菌T-DNA插入突变体库,其突变体的遗传稳定性较高。通过筛选获得了一些表型明显变化的突变体,利用TAIL-PCR方法获得了T-DNA插入侧翼序列,利用生物信息学分析定位插入位点,进而分析突变体的基因功能。其中,突变体841是一株铜转运蛋白基因被打断的突变体。该突变体形态变化较大,酵母相的转化能力变弱,且对过氧化氢敏感,抗氧化应激能力下降,小鼠系统性感染模型显示其致病力较野生型低。表明铜转运蛋白基因参与调控申克孢子丝菌的生长和抗氧化应激的能力,并与申克孢子丝菌的致病力有关。
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