【摘 要】
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目的:构建含变形链球菌乳酸脱氢酶(LDH)和霍乱毒素B亚单位(CTB)嵌合原核表达质粒,并诱导表达融合蛋白。方法:应用PCR技术扩增LDH编码基因ldh和CT)编码基因ctxB,定向克隆至原
【机 构】
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遵义医学院附属口腔医院; 中国科学院成都生物研究所;
【基金项目】
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国家自然科学基金(30160086)资助项目;贵州省优秀教育科技人才省长专项基金资助项目;贵州省高层次人才特别资助项目
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目的:构建含变形链球菌乳酸脱氢酶(LDH)和霍乱毒素B亚单位(CTB)嵌合原核表达质粒,并诱导表达融合蛋白。方法:应用PCR技术扩增LDH编码基因ldh和CT)编码基因ctxB,定向克隆至原核表达质粒pET32a(+)上,通过限制性酶切、PCR 和序列测定分析鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3),并经IPTG诱导表达融合蛋白。结果:PCR扩增得到了ldh及ctxB;构建的质粒pET-ldh-ctxB经Kpn Ⅰ、Xho Ⅰ双酶切及目的基因PCR检测,均得到约1．4 kb大小的片段,与预计目的基因片段大小相同;质粒pET-ldh-ctxB中插入的ldh序列与GeneBank中ldh比较同源性为98％,ctxB的同源性达99％,插入的相位正确;经IPTG诱导表达了约70KD的蛋白。结论:成功构建了变形链球菌LDH和CTB嵌合表达质粒pET-ldh-ctxB,并正确表达融合蛋白。
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