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目的:临床上原发性噬血细胞综合征(pHLH)和继发性噬血细胞综合征(sHLH)的鉴别诊断对选用合适的治疗方案具有重要意义。国外研究表明,流式细胞术(FCM)检测相关蛋白有助于pHLH的快速诊断。本研究试图建立9种pHLH相关蛋白的FCM检测正常值,探讨其实用价值。方法:收集30例体检正常儿童和7例符合HLH-2004诊断标准的患儿作为研究对象,采用FCM测定外周血NK细胞内9种pHLH相关蛋白包括Perforin、Munc13-4、Syntaxin-11、Munc18-2、SAP、XIAP、Rab27a、Ap331、Lyst,建立正常值。对7例HLH患儿在测定该9种蛋白的同时,采用病人DNA通过二代测序法系统测序编码该9种蛋白的相关基因PRF1、UNC13D、STX11、STXBP2、SH2D1A、BIRC4、RAB27A、AP3B1、LYST。并采用FCM测定NK细胞膜CD107a表达观测细胞脱颗粒能力。结果:(1)根据30例正常儿童外周血NK细胞pHLH相关蛋白检测结果建立pHLH相关蛋白的正常值(表1)。(2)7例HLH患儿pHLH相关蛋白检测发现病例1-5有相关蛋白表达量低于正常,其中病例2、3有多个蛋白低于正常(表2略)。相关基因测序检测均发现有临床致病性不明的突变,其中病例1、2、3、5有外显子杂合突变,病例3-7均有内含子杂合突变(表3略)。除病例5外,其余病例EBV-DNA检查均阳性(表3略)。(3)病例2发现Lyst蛋白低于正常,LYST基因存在杂合突变,并发现CD107a检测明显降低,诊断为pHLH;病例1、3、4、6、7 EBV检测阳性,虽然有相关蛋白表达降低,但未发现相应的基因突变,故诊断为sHLH(EBV相关);病例5 EBV检测阴性,但也未发现有相关基因缺陷,故也诊断为sHLH(原因待查)。7例HLH自诊断至今存活分别已达2-9个月,目前尚在以HLH-2004方案治疗随访过程中。结论:(1)成功建立了儿童pHLH相关蛋白正常值。(2)pHLH相关蛋白检测对快速诊断pHLH有参考作用。