肿瘤细胞来源IgG重链可变区糖基表位模拟肽的筛选与鉴定

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研究背景:非B细胞来源Ig(non-Ig)不仅在多种肿瘤细胞中存在,在肿瘤恶化、迁移和增殖中也具有重要作用。2008年,Lee发现肿瘤细胞来源的IgG重链成份(CA215)和正常人IgG高度同源,单抗RP215可特异性识别肿瘤Ig重链可变区特殊的糖基表位(CA215C),但不识别正常人Ig。在卵巢癌、宫颈癌、结肠癌等多种肿瘤组织和患者血清中,CA215检测呈阳性;RP215单抗不仅能在体外实验中抑制肿瘤细胞的增殖和诱导其凋亡,还可有效抑制裸鼠体内的肿瘤增长。因此,作为一种泛肿瘤标志,CA215可作为肿瘤诊断和治疗的新靶点。由于CA215是糖基表位,属于TI抗原,限制了其直接成为疫苗候选靶点的可能性。本研究以单抗RP215为靶分子,利用噬菌体展示肽库技术可将其转化为肽表位。目的:筛选肿瘤细胞来源的IgG重链可变区糖基表位的模拟肽,探索用于治疗性肿瘤疫苗的新候选表位。方法:用特异性识别肿瘤来源Ig重链可变区特殊糖基表位CA215的单克隆抗体RP215作为钓饵分子,筛选噬菌体12肽库,双夹心ELISA鉴定噬菌体克隆,根据阳性克隆的DNA序列,合成线性肽并鉴定其与RP215的结合。以BSA为载体交联线性肽免疫小鼠,并对其免疫血清进行鉴定。结果:以RP215为钓饵蛋白对噬菌体12肽库进行3轮筛选后,得到22个可与RP215结合的噬菌体克隆,经DNA序列分析显示,其中17个克隆的氨基酸序列中包含5组保守序列,其余5个克隆的序列均不相同。经对比后选择3个序列进行肽合成,经ELISA检测表明其中两个序列R-2和R-42合成肽可特异地与单抗RP215结合。以BSA为载体的合成肽交联物免疫的小鼠抗血清可与CA215特异性结合,并能有效竞争抑制RP215和CA215的结合。结论:筛选得到的噬菌体克隆及合成线性肽R-2/R-42可与RP215特异性结合,合成线性肽和BSA交联后免疫小鼠得到的抗血清具有和RP215相似的特性,提示该合成肽可能为肿瘤细胞来源IgG重链可变区特殊糖基结构CA215的表位模拟短肽。
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