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黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic vitus,CMV)是目前所知寄主范围最多、分布最广、最具经济危害的植物病毒之一,对其弱毒疫苗的研制对植物预防CMV具有重要意义。本研究以CMV Fny株系侵染性克隆为研究对象,选取CMV TLS (tRNA-liking-structure)结构和2b蛋白作为改造位点,对CMV的TLS结构与2b蛋白进行突变,构建TLS保守区域缺失的极端突变pCB-Fny1-TLSm1、pCB-Fny2-TLSm1、pCB-Fny3-TLSm1;TLS保守区域插入18个碱基型突变pCB-Fny1-TLSm2、pCB-Fny2-TLSm2、pCB-Fny3-TLSm2;2b蛋白提前终止型突变pCBFny2-del2bN。将突变型侵染性克隆利用农杆菌浸润方法,接种6叶期本生烟,7d后发现TLS缺失型突变与插入型突变均能引起严重的病毒病症状,感染植株均表现为叶片严重皱缩,植株矮化,伴随不同程度的花叶症状;接种2b蛋白提前终止型突变的植株未出现叶片皱缩、植株矮化等症状,与未接种的植株长势类似。对接种植株做RT-PCR检测,均能检测到CMV的存在,对PCR产物进行测序分析,发现2b突变位点仍存在,TLS缺失型突变位点有不同程度的回复突变现象,TLS插入型突变位点均回复突变。研究表明,TLS结构保守区域的突变和2b蛋白提前终止的突变都不影响CMV的侵染性;TLS突变不影响CMV的致病力,而对2b蛋白的突变能够造成CMV致病力的明显减弱。3种不同类型的CMV突变体的致病力研究对CMV弱毒疫苗构建的突变位点选择提供了实验依据。