目的构建结核分枝杆菌强弱毒力株差异基因文库,克隆和筛选结核分枝杆菌强弱毒力株差异基因。方法通过毒力测定,选择出临床强弱毒株各1株。利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH),对强弱菌株基因组用RsaI酶切,连接adaptor后进行两轮消减杂交和两次PCR。将第2次PCR产物纯化后与pGEM-T载体连接,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)DH5α进行文库扩增和蓝白斑筛选。挑取阳性克隆进行质粒提取,酶切验证阳性克隆,进而对部分片段进行测序和同源分析。结果以结核分枝杆菌强毒株DNA为检测子的正向杂交和以弱毒株DNA为检测子的反向杂交各自高表达或特异性表达的片段得到选择性扩增,连接adaptor效率大于50%,消减组与非消减组差异明显,成功构建了结核分枝杆菌强弱毒力株差异基因文库A库和B库。挑出阳性克隆102个,片段大小集中在100～900 bp之间。结论利用SSH技术成功构建了结核分枝杆菌强弱毒株差异基因文库,该消减文库的建立为进一步筛选、克隆这两种菌株之间差异的毒力基因奠定了基础。