小干扰RNA抑制RSV感染Hela细胞的效果评价

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背景:呼吸道合胞病毒是导致婴幼儿感染的主要病毒病原体,到目前为止,尚无一种安全有效的药物或疫苗可用于防治RSV感染,病毒进入细胞是病毒感染及复制的关键,目前关于RSV胞吞入胞的研究取得了一些进展,网格蛋白介导型内吞途径是目前研究得较为透彻且经典的病毒入胞途径,其中网格蛋白在此途径中的地位是很重要的。目的:利用针对网格蛋白重链的siRNA抑制网格蛋白的表达,从而抑制RSV的感染,为RSV抗病毒药物的研制提供科学基础。方法:QIAGEN公司定制经验证有效的针对网格蛋白重链的siRNA,并从基因水平验证其沉默的有效性,结果显示其沉默效率为94.6%;将经验证有效的siRNA转染Hela细胞48h后,接种RSV病毒,待空白对照出现70%-80%以上合胞病变时,收集病毒液上清,通过细胞半数感染量(TCID50)和实时荧光定量PCR技术检测所收集病毒液上清的病毒含量从而来评价siRNA抑制RSV感染Hela细胞的效果。结果:TCID50实验显示siRNA作用组的log10TCID50值明显比空白对照组低,为4.78±0.09,空白对照组为7.52±0.31,而siRNA作用组RSV N基因mRNA的表达量也明显比空白对照组的低,为10.8%,空白对照组为100%。结论:通过siRNA抑制细胞表面网格蛋白重链的表达,可有效的抑制RSV感染Hela细胞;这将为RSV抗病毒药物的研制提供科学依据
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