【摘 要】
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构建人RAGEsh-RNA表达载体,探讨其对雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞中糖基化终末产物受体(Receptor for advanced glycation endproducts,RAGE)基因表达的影响,以深入了解R
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构建人RAGEsh-RNA表达载体,探讨其对雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞中糖基化终末产物受体(Receptor for advanced glycation endproducts,RAGE)基因表达的影响,以深入了解RAGE基因在前列腺癌发生、发展中的作用。用Ambion软件设计并合成4种RAGE-shRNA,并克隆至piU6载体,分为三组,实验组以RAGE-shRNA(1,2,3,4),下同]转染RAGE基因高表达的前列腺癌细胞系DU145细胞亚克隆2C1,对照组以等量阴性对照siRNA转染DU145细胞亚克隆2C1,空白组为未做处理的DU145细胞亚克隆2C1,分别做瞬转和稳转,实时荧光定量PCR技术检测转染后DU145细胞中RAGE mRNA的表达情况,蛋白印迹法测定DU145细胞中RAGE蛋白的表达情况;CCK-8法检测shRNA对DU145细胞增殖的影响。荧光显微镜下观察瞬转阳性率约40%,在转染表达载体后,DU145细胞的形态发生了显著变化;实验组不同RAGE-shRNA转染后,DU145细胞与对照组比较,DU145细胞中RAGEmRNA及蛋白的表达水平明显下调,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组DU145细胞生长较对照组明显受到抑制(P<0.05)。构建的RNAi表达载体RAGE-shRNA可以有效的下调RAGE mRNA及其蛋白的表达水平,抑制细胞生长,其中RAGE-shRNA-1的抑制作用更强。
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