【摘 要】
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目的来源于人类免疫缺陷病毒(HIV)-I型编码的反式激活蛋白(TAT)中的蛋白质转导域(PTD),能介导生物大分子通过血脑屏障。本文拟制备一种经血管途径给药后能通过血脑屏障(BBB)
【机 构】
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南方医科大学珠江医院新药研发中心;
【基金项目】
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国家教育部留学回国人员科研启动基金(2005);广东省自然科学基金(C032828);广州市科技攻关项目(2005Z3-E0171)资助课题
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目的来源于人类免疫缺陷病毒(HIV)-I型编码的反式激活蛋白(TAT)中的蛋白质转导域(PTD),能介导生物大分子通过血脑屏障。本文拟制备一种经血管途径给药后能通过血脑屏障(BBB)进入大脑的脑源性神经营养因子(BDNF)-TAT(PTD)融合蛋白。方法克隆编码BDNF-TAT的cDNA,并经限制性内切酶酶切和核酸序列测定分析;构建其原核生物细胞表达载体,并在宿主细胞中进行诱导与表达,经亲和层析方法纯化融合蛋白,利用SDS-PAGE和Western blot进行鉴定,研究该融合蛋白促进神经细胞增生的生物活性,用免疫组化的方法研究经血管途径给予该融合蛋白后透过动物体内BBB的能力。结果成功获得了编码BDNF-TAT融合蛋白的cDNA及其原核细胞表达载体;经纯化和鉴定得到了BDNF-TAT融合蛋白,分子量约为21kD;该融合蛋白能够促进神经细胞的增生;经尾静脉注射给药后4小时后,同对照组相比,样品组脑组织中皮层和海马等区域出现强阳性表达。结论成功获得了BDNF-TAT融合蛋白,该融合蛋白具有生物学活性,并能够经血管途径给药后透过BBB进入大脑,具有治疗脑神经退行性疾病的应用前景。
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