【摘 要】
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本文以黄瓜、甜瓜和西瓜枯萎尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum Schl.)为研究对象,通过致病性测定和UP-PCR等技术分析,划分其专化型。从辽宁省10个地区采集西瓜、甜瓜和黄瓜枯萎
【基金项目】
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辽宁省科技攻关项目(2006215004);辽宁省自然科学基金项目(20062018)
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本文以黄瓜、甜瓜和西瓜枯萎尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum Schl.)为研究对象,通过致病性测定和UP-PCR等技术分析,划分其专化型。从辽宁省10个地区采集西瓜、甜瓜和黄瓜枯萎病病株,分离获得74株尖孢镰孢菌,选择经单孢纯化的3种专化型镰孢菌15株,采用切根灌注法,分别对甜瓜、黄瓜和西瓜3种寄主进行致病性测定。结果表明,所有尖孢镰孢菌对甜瓜、黄瓜及西瓜都有一定程度的为害,但致病力存在显著差异。同一种专化型菌株对其对应的寄主的致病力明显高于其他两种专化型的致病力。采用UP-PCR(Universally Primed PCR)技术,对采自辽宁省不同地区的21株西瓜、甜瓜和黄瓜枯萎尖孢镰孢菌不同专化型进行了遗传多样性分析。筛选出6个扩增多态性好且稳定的通用引物,共扩增出61条带,其中多态性条带58条,占总条带数的95.1%。通过聚类分析,在相似系数0.746处,除F-X.SY0974、F-T.SY0840、F-H.03623个菌株各成一群,其余18株尖孢镰孢菌分为3个类群,每个类群的菌株均来源于同一种寄主植株,确定了菌株间的亲缘关系。为瓜类枯萎病原菌尖孢镰孢菌的专化型划分提供分子生物学辅助技术。应用农杆菌介导技术,建立了甜瓜尖孢镰孢菌的绿色荧光蛋白基因转化体系。成功将质粒pSMY206中绿色荧光蛋白基因转入到甜瓜尖孢镰孢菌F-T.FS0811菌株中。转化体连续转接6代后能够稳定遗传,且荧光强度良好,转化后的菌落形态与菌丝生长速度不受影响,对寄主仍有侵染致病能力。PCR验证也表明gfp基因已转入到菌株F-T.FS0811中。甜瓜枯萎病菌绿色荧光蛋白基因转化体的成功构建为该病菌侵染机制的研究奠定了基础。
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