玉米叶斑病的快速检测研究

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本研究将实验室已有的平脐蠕孢菌株的延长因子1α基因(elongation factor 1α,EF-1α)部分序列进行比对并设计出玉蜀黍平脐蠕孢菌(Bipolaris maydis)特异性引物X-EF-F/X-EF-R和玉米生平脐蠕孢菌(Bipolaris zeicola)的特异性引物Y-EF-F/Y-EF-R,用这两对特异性引物分别可以从对应的目的菌株中扩增出205bp、137bp的特异片段,而其余的16个参试菌株扩增结果为阴性。灵敏度实验证明可以检测到目标DNA的浓度分别为10pg和1pg。用玉蜀黍平脐蠕孢菌和玉米生平脐蠕孢菌接种玉米叶片,以接种发病的病组织DNA为模板,利用引物X-EF-F/X-EF-R和Y-EF-F/Y-EF-R分别进行PCR扩增,同样可以扩增出205bp和137bp的特异性条带,而健康玉米组织DNA中未能扩增出任何条带,表明该方法可用于快速、准确和灵敏地检测玉蜀黍平脐蠕孢菌和玉米生平脐孺孢菌。本研究利用3对玉米锈病检测的特异性引物,对河南省14个地区的28株锈病病原菌进行分子检测,以提取的DNA为模板,利用多堆锈病特异性引物JL-SP3∕JL-ITS-R和N1-F/N1R分别均扩增出约483 bp和356 bp的片段,与目的片段大小一致;利用玉米柄锈菌特异性引物HN-SP2-F∕HN-SP1-R进行扩增,参试菌株未扩增出任何片段;以双蒸水为模板的对照未扩增到目的片段;证明28株锈菌都来源于南方型锈病。本研究为河南省玉米小斑病、玉米圆斑病和玉米锈病快速诊断和监测预警提供参考依据,对及早采取防止措施提供积极的指导意义。
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