分选酶A(Sortase A,SrtA)是一种半胱氨酸转肽酶,能够将携带LPXTG基序分选信号的表面蛋白锚定到细胞壁被膜上,从而介导细菌粘附到宿主组织,侵入宿主细胞,以及逃避免疫,是金黄色葡萄球菌(金葡菌)的重要毒力因子。正因如此,SrtA成为治疗金葡菌感染的发展的一个重要靶标。在这项研究中,我们采用了新的参考菌株金黄色葡萄球菌Newman D2C来探讨SrtA在血液感染小鼠模型中的作用,这种菌株不能产生凝固酶和溶血素,因此我们可以排除这两种金葡菌中重要毒力因子的干扰。本实验中,我们通过基因重组的方法成功构建了金葡菌SrtA基因敲除菌株△SrtA,并且通过免疫荧光的方法,证明金葡菌△SrtA不能将表面蛋白A(SpA)锚定到细菌细胞壁肽聚糖上。另外通过纤连蛋白和纤维蛋白原黏附实验,证实△SrtA缺失减少了金葡菌对纤维蛋白原和纤连蛋白的黏附能力。为了考察SrtA对金葡菌致病力的影响,以及今后能够筛选出有效的SrtA抑制剂,我们构建了小鼠(BALB/c雌鼠,6-8周)通过血液感染金葡菌的模型。结果表明,在感染早期,SrtA缺失可以通过减少宿主的炎性细胞因子(IFN-γ,IL-6,TNFα,IL-1β,IL-6,IL-12p70 and IL-17A)释放从而减少小鼠心脏、肝脏和肾脏的载菌量。小鼠的非致死性感染的第六天后,通过肉眼和病理组织切片观察,只有肾脏形成了脓肿,而△SrtA没有出现肾脏脓肿的现象。致死性感染的结果显示,相对Newman D2C而言,SrtA缺失使老鼠的存活率显著增加(100%)。以上这些结果表明,在金葡菌通过血液感染小鼠的模型中,SrtA是小鼠死亡和肾脓肿形成的决定性因素。因此可以说,我们建立了一种方便有效的以SrtA为靶标的抑制剂筛选的体外及体内小鼠模型,为金葡菌感染治疗开拓新的途径。