【摘 要】
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目的:研究miR-155对成骨细胞骨分化的调节作用以及作用机制。材料与方法:利用分段酶消化法从新生c57小鼠牙槽骨中获得成骨原代细胞,显微镜下观察细胞形态,然后采取ALP染色和
【机 构】
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南京大学医学院附属口腔医院南京市口腔医院;
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目的:研究miR-155对成骨细胞骨分化的调节作用以及作用机制。材料与方法:利用分段酶消化法从新生c57小鼠牙槽骨中获得成骨原代细胞,显微镜下观察细胞形态,然后采取ALP染色和茜素红染色对其进行鉴定。并将原代成骨细胞细胞分为对照组、诱导组、miR-155组和miR-155阴性对照组,对照组用α-MEM培养基培养,诱导组在α-MEM培养液中添加50μM抗坏血酸, 10mmβ-磷酸甘油和100nm地塞米松进行成骨诱导,miR-155组和miR-155阴性对照组在成骨诱导之前分别转染miR-155 mimic和miR-155 mimic negative,诱导2天。结果:(1)茜素红染色及磷酸酶活性测定:诱导组细胞茜素红着色强度、碱性磷酸酶活性和mRNA表达显著高于对照组(P<0.01);miR-155组茜素红着色强度明显低于诱导组,碱性磷酸酶活性和mRNA也明显低于对照组(P<0.01),(2)荧光报告基因检测和westernblot检测:miR-155可与HIF-1αmRNA3’非编码区结合,并明显降低c57小鼠原代成骨细胞中HIF-1α蛋白和mR NA表达(P <0.01)。结论:miR-155可通过负性调控HIF-1α表达,抑制c57小鼠原代成骨细胞的成骨分化。
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