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目的:原核表达牛轮状病毒VP6蛋白,检测该蛋白的反应原性以纯化的VP6蛋白为抗原。目的是建立一种新的牛轮状病毒胶体金免疫层析试纸条检测方法。方法是对牛轮状病毒内衣壳蛋白VP6保守区设计并合成引物,表达牛轮状病毒VP6蛋白,应用Western Blot分析该蛋白的反应原性。结果利用RT-PCR方法成功扩增出目的基因,经过测序与酶切鉴定,正确构建了表达载体p ET-28a-VP6,SDS-PAGE实验显示表达产物为44KD、37KD、27KD 3种不同相对分子质量的重组蛋白;同时构建了p ET-32a-VP6,SDS-PAGE电泳显示表达产物在60KD表达重组蛋白。经过Western Blot检测,该蛋白具有良好的反应原性。经亲和层析纯化好的牛轮状病毒重组VP6蛋白包被酶标板,进行间接ELISA实验,经各个环节的优化,确定好反应条件,初步建立了牛轮状病毒间接ELISA诊断方法,同时经原核表达、蛋白纯化的牛轮状病毒内衣壳蛋白VP6作为检测抗原,利用柠檬酸三钠还原氯金酸的方法,制备不同粒径的胶体金颗粒,进行筛选金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)为胶体金标记抗原的最佳条件,制备牛轮状病毒免疫胶体金试纸条,检测犊牛血清中轮状病毒特异性抗体,并验证制备的试纸条的特异性和敏感性,用建立好的间接ELISA的方法与进口的比利时瑞尔检测牛轮状病毒抗体的试剂盒同时对采集的新疆北疆部分地区:石河子、沙湾、奎屯、昌吉等10多个规模化牛场的腹泻犊牛血清26份和部分健康犊牛血清进行检测,符合率达到92.3%,用30nm金颗粒制备的牛轮状病毒试纸条敏感性最高,胶体金最适标记PH为6.8,SPA蛋白最佳标记量是10ug/m L,试纸条最高可检出牛轮状病毒阳性血清1:100,用制备的免疫层析试纸条与WB、ELISA分别对26份临床样本进行检测。阳性率分别为76.9%(20/26)、69.2%(18/26)、84.6%(22/26),WB检出的阳性的均能被试纸条检出,2份疑似阳性的血清也能被检出,与ELISA符合率90.9%,整个过程在5min内出结果,本试纸条在室温可保存3个月。结论说明此方法适合用于规模化牛场致犊牛腹泻病原和血清抗体的初步检测,制备的检测牛轮状病毒抗体胶体金免疫层析试纸条具有敏感、简便、快速、特异等优点,为规模化牛场犊牛轮状病毒抗体检测提供了基础。