黄芪防己汤含药血清对TGF-β1诱导的足细胞损害的影响

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目的观察黄芪防己汤对TGF-β1诱导的肾小球足细胞存活率、线粒体膜电位以及表型分P-钙粘蛋白(P-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的影响,探讨经典祛风湿中药方剂对足细胞损伤的保护作用,为临床应用该类中药治疗肾性蛋白尿提供科学依据。方法将足细胞传代培养于培养皿中,37°C分化培养,分为正常组、模型组、防己黄芪汤干预组。模型组及干预组分别用TGF-β1(终浓度5ng/ml)刺激,干预组在此基础上用含10%防己黄芪表型汤大鼠含药血清进行干预,正常组和模型组则用10%正常大鼠血清平衡。采用MTT法检测培养细胞的存活率,流式细胞术检测细胞线粒体膜电位,逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)技术检测NEPH1、P-cadherin和α-SMA的基因表达。结果 MTT检测各组细胞存活率无显著差异;JC-1试剂检测细胞线粒体膜电位显示模型组红色荧光/绿色荧光比值低于正常组(1.65±0.22 vs 2.14±0.10),防己黄芪汤组细胞红色荧光/绿色荧光比值较模型组升高(1.65±0.22 vs 2.24±0.76),但各组间未显示出统计学差异。RT-PCR结果提示,模型组P-cadherin mRNA表达较正常组下调(0.82±0.36 vs1.00±0.00),而防己黄芪汤含药血清干预组P-cadherin mRNA表达较模型组明显上调(0.82±0.36 vs 1.06±0.16);模型组α-SMA mRNA表达较正常组增高(1.41±0.28vs 1.00±0.00),防己黄芪汤含药血清组各组间表达无显著性差异。结论防己黄芪汤含药血清可在一定程度上抑制TGF-β1诱导的肾小球足细胞线粒体膜电位下降,对足细胞表型分子P-cadherin基因表达具有一定的稳定作用,可抑制TGF-β1对肌成纤维标志蛋白α-SMA表达的上调作用。提示经典祛风湿中药方——防己黄芪汤含药血清在体外具有保护足细胞的作用。
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