β3AR通过cGMP-PKG-P38通路调控心肌MIF发挥抗凋亡作用

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目的巨噬细胞移动抑制因子(Macrophage migrationinhibitory factor,MIF)在衰竭的心脏中高表达,本研究探讨MIF在心肌细胞中的调控机制及对心衰发展的影响。方法采用药理学方法和基因敲除技术,通过westernblot和qPCR,摸索ISO刺激AC16细胞和乳鼠心肌细胞诱导MIF蛋白和mRNA表达的量效曲线和时效曲线,通过ELISA测定外排入培养基的MIF,确定最佳的ISO浓度和作用时间。采用b1、b2、b3AR的抑制剂bisoprolol,ICI118551,SR 59230A预处理细胞后加入ISO刺激;同时采用3种bAR的特异性兴奋剂:dobutamine,clenbuterol,BRL 37344处理细胞。设计并构建b3AR siRNA载体,转染心肌细胞。用不同工具药或腺病毒预孵AC16细胞,包括PTX(抑制Gai)、bARKct腺病毒(抑制Gbg亚基)、L-NAME(抑制eNOS)、ODQ(抑制GC)、KT5823(抑制PKG)、8-pCPT-cGMP、PD169316(抑制p38MAPK)、curcuma(抑制AP1),测定细胞内MIF蛋白和mRNA表达量。大鼠结扎左前降,比索洛尔、卡维地洛和SR 59230A治疗4周,B超测心功能;tunel法测凋亡;western blot,qPCR,IHC检测MIF基因在转录、蛋白水平和空间的表达差异。结果ISO浓度和时间依赖性的上调心肌细胞中的MIF,BRL 37344可增加AC16细胞MIF表达,而SR 59230A或采用siRNA沉默b3AR后可以阻断这一过程。ODQ、KT 5823和PD169316均明显减弱MIF表达,8-pCPT-cGMP可逆转MIF减少。大鼠结扎左前降支造成心衰,SR 59230A进一步恶化心功能,减少心肌MIF,促进心肌细胞凋亡。结论ISO通过b3AR-cGMP-PKG-P38信号通路调控心肌细胞产生MIF,保护心肌细胞免于凋亡。
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