【目的】泰乐菌素和替米考星是大环内酯类畜禽专用抗生素,具有抗菌谱广,毒性低,抗革兰氏阳性菌和抗支原体活性强等特点,同时也是农业部审批允许作为饲料添加剂的新型兽药,因此在兽医临床上广泛应用。尤其在治疗奶牛乳房炎中,用药剂量过大或未遵守休药期规定等现象时有发生,导致了药物在牛奶中的残留,通过食物链间接影响人类健康,如引起致敏性、毒性、超过敏性等副作用,造成机体菌群失调。而目前的检测方法主要为仪器分析法和免疫分析法。仪器分析法操作繁琐,成本高昂;在免疫分析法中,酶联免疫吸附法仍然存在前处理复杂等劣势,胶体金免疫层析法虽然快速简便,但灵敏度低,容易出现假阴性结果。新型材料荧光微球集快速、灵敏、特异、稳定于一体,成为科研工作者的热点研究课题。因此本试验拟建立一种基于单一抗体的荧光微球免疫层析法来快速定量检测牛奶中泰乐菌素和替米考星残留。【方法】将泰乐菌素牛血清白蛋白包被原和羊抗鼠单克隆抗体分别作为检测线（T线）和质检线（C线）喷涂在硝酸纤维素膜上,和样品垫、吸水垫共同组装制备试纸条。通过调试核心因素如荧光微球的颜色和粒径、抗体用量和标记时间等使荧光微球表面羧基与抗替米考星多克隆抗体共价结合制备荧光检测探针。基于间接竞争原理,牛奶中残留的替米考星或泰乐菌素和包被原共同竞争结合该探针,通过荧光读数仪读取T线荧光信号强度从而实现快速定量检测的目的。【结果】试验表明,该方法对牛奶中残留的泰乐菌素和替米考星的检测限分别为0.60μg/L和0.03μg/L,IC₅₀分别为2.40μg/L和0.18μg/L,在0.36³24λg/L和0.036³2.4μg/L范围内线性良好,回收率分别为98%¹03%和87%⁹8%,并且与同类其他大环内酯类药物几乎无交叉。和胶体金免疫层析法相比,对样品中基质的抗干扰性能更强,成本更低。【结论】本文基于单一抗体建立了一种快速灵敏定量检测牛奶中泰乐菌素和替米考星残留的荧光微球免疫层析法。