三氯乙烯对Jurkat T细胞毒性作用及机制的探讨研究

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【目的】三氯乙烯(Trichloroethylene,TCE)是一种常见的卤代烃类有机溶剂,常作为清洁剂、去脂剂、萃取剂等广泛应用于五金、印刷、电镀、玩具制造等行业,接触TCE可引起发热、皮疹、淋巴结肿大为主要症状的三氯乙烯药疹样皮炎。有研究认为三氯乙烯药疹样皮炎可能是一种变态反应性疾病,其致病机制主要是TCE引起的免疫损伤。Jurkat T细胞为源自T细胞白血病患者的外周血中的细胞株,与人外周血T淋巴细胞有许多共同的特点,适用于外源化合物免疫毒性研究。本研究以Jurkat T细胞为模型,观察不同浓度三氯乙烯对Jurkat T细胞的影响,研究三氯乙烯对Jurkat T细胞的毒性作用及机制,以便进一步推论TCE对T淋巴细胞的影响,进而探讨三氯乙烯药疹样皮炎的发病机制。【方法】用不同浓度三氯乙烯作用于未活化Jurkat T细胞及用佛波醇酯(Phorbol myristate acetate,PMA)和离子霉素(Ionomycin,IO)活化的Jurkat T细胞,倒置荧光显微镜下观察细胞的生长形态、CCK-8法检测细胞活力、FITC Annexin V Apoptosis Detection K试剂盒测定细胞凋亡率,Elisa试剂盒测定IL-2分泌量、流式细胞术检测细胞活化表面标志物CD69分子的表达以及细胞活化Ca2+内流情况。SPSS13.0软件分析数据,。【结果】1.随着染毒浓度的升高,Jurkat T细胞体积逐渐变小、细胞透亮度降低、细胞轮廓趋向不规则。10 mmol/L TCE染毒组细胞出现细胞膜破裂、细胞骨架解体、核固缩、核破裂。2.TCE终浓度低于2mmol/l以下时未见对Jurkat T细胞活力的影响,终浓度高于5 mmol/l TCE的染毒Jurkat T细胞,培养24、48、72小时的实验组细胞活力较对照组均显著降低,并随浓度升高活力进一步下降。3.TCE染毒终浓度为2、0.02、0.0002 mmol/l时Jurkat T细胞早期凋亡率、晚期凋亡率与对照组无显著差异。4.未活化的Jurkat T细胞加入不同浓度TCE,培养的24、48、72小时均未检测到IL-2分泌。活化的Jurkat T细胞加入0.000002mmol/l的TCE即可使IL-2分泌量增加,并随培养时间延长IL-2分泌量呈增高的趋势。5.加入激活物PMA和IO培养4小时可以使Jurkat T细胞表达活化早期标志CD69分子,但不同浓度TCE实验组与对照组Jurkat T细胞CD69分子表达率差异无统计学意义(p>0.05)。6.加入激活物PMA和IO培养4小时检测到细胞内Ca2+浓度升高,但不同浓度TCE实验组与对照组Jurkat T细胞活化Ca2+平均荧光强度差异无统计学意义(p>0.05)。【结论】TCE染毒可使Jurkat T细胞活力下降,IL-2分泌增高,证明其具有免疫毒性。但未见对CD69表达和Ca2+内流的显著影响,TCE对Jurkat T细胞IL-2分泌的影响可能不是通过影响Ca2+内流实现的。
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