【摘 要】
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目的:构建变形链球菌葡糖基转移酶植物表达质粒p2355-gtfB、p2365-gtfB,为其转化植物研究奠定物质基础。方法:以真核表达质粒pcDNA3-gtfB为模板,通过PCR方法扩增含多个编码变
【基金项目】
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国家自然科学基金(30160086)资助项目;贵州省优秀教育科技人才省长专项基金资助项目;贵州省高层次人才特别资助项目
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目的:构建变形链球菌葡糖基转移酶植物表达质粒p2355-gtfB、p2365-gtfB,为其转化植物研究奠定物质基础。方法:以真核表达质粒pcDNA3-gtfB为模板,通过PCR方法扩增含多个编码变形链球菌葡糖基转移酶抗原表位的目的基因gtfB,将回收产物经T-A克隆技术克降于中间载体pMD18-T,鉴定插入方向正确后,将目的基因从中间载体释放,再克隆至高效的植物表达载体p2355、p2365,用电转化法转化根癌农杆菌EHA105。结果:通过对重组质粒进行酶切验证和DNA序列测定分析,获得 3．7kb大小的目的基因gtfR,与预计大小相同,并定向插入植物表达载体,开放阅读框架正确。结论:成功构建了含多个葡糖基转移酶免疫显性抗原编码基因的植物表达质粒p2355-gtfB、p2365-gtfB,为下一步转化植物奠定了基础。
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