目的研究Syk对MDA—MB—231细胞株IL—2受体表达的影响,并探讨相关信号转导途径,从而进一步揭示Syk抑癌作用的实质。方法用RT—PCR技术从人乳腺癌细胞株MDA—MB—468扩增出Syk编码序列基因片段,将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1D/V5—His—TOPO中。对重组质粒进行酶切、PCR及测序鉴定后,以脂质体介导法转染Syk缺失的人乳腺癌细胞MDA—MB—231,经G418筛选,构建Syk基因稳定表达的细胞株,通过RT—PCR检测转染乳腺癌细胞Syk的表达。应用RT—PCR技术检测转染后与未转染的MDA—MB—231细胞株IL—2受体α、β、γ三种亚基表达变化的情况。用MTT法检测不同浓度(100u/ml、500u/ml、1000 u/ml、2000u/ml)人重组IL—2对转染或未转染Syk的MDA—MB—231细胞株增殖和凋亡的影响。结果构建了hsyk真核表达载体pcD-NA3.1D /V5—His—TOPO/hsyk,并在人乳腺癌细胞MDA—MB—231中获得稳定表达,经RT—PCR检测出Syk稳定表达。RT—PCR检测结果显示转染后的MDA—MB—231细胞IL—2受体β亚基表达明显上调(P<0.05).α、γ亚基改变不明显(P>0.05)。MTT结果显示转染组细胞加入中浓度以及高浓度(500u/ml、1000 u/ml、2000u/ml)人重组IL—2后凋亡率明显高于未转染组。结论成功地构建了Syk真核表达载体使Syk在MDA—MB—231中稳定表达.研究发现转染后Syk能够上调IL—2受体β亚基的表达。而对α、γ亚基的表达影响不明显。乳腺癌组织中Syk的表达和激活与IL—2R的表达及信号转导存在一定的联系。