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目的:1.观察哮喘大鼠肺组织中AKT、P70S6K以及细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的活性变化,并探讨PI3K信号转导途径在哮喘大鼠气道ASMCs增殖中的作用;2.观察罗红霉素对PI3K信号转导途径的影响,探讨罗红霉素抗哮喘的作用机制。方法:SPF级雄性SD大鼠48只,体重200±10g,随机分为4组:正常对照组(C)、哮喘组(A)、wortmannin干预组(W)和罗红霉素干预组(R),每组12只。以卵蛋白(OVA)致敏和激发的方法制备大鼠慢性哮喘模型。末次激发24小时后腹腔注射麻醉,股动脉放血处死大鼠。肺组织HE染色,光镜下找到完整的支气管横断面,应用图象分析软件测定支气管基底膜周径(Pbm)、支气管总面积(Wat1)、管腔面积(Wat2)、平滑肌外缘内气管面积(Wam1)、平滑肌内缘内气管面积(Wam2),计算标准化总管壁厚度(Wat)为(Wat1-Wat2)/Pbm,标准化平滑肌厚度(Wam)为(Wam1-Wam2)/Pbm。免疫组化检测肺组织中磷酸化AKT(P-AKT)及磷酸化P70S6K(P-P70S6K)表达情况。Western-blot检测肺组织中磷酸化AKT及磷酸化P70S6K表达情况。RT-PCR检测肺组织中cyclinD1 mRNA的表达情况。结果:1.肺组织HE染色光镜观察:光镜下C组大鼠支气管上皮完整,无明显炎症反应,肺组织形态正常;A组大鼠可见支气管上皮脱落,支气管壁和血管壁周围有大量炎性细胞浸润,基底膜和平滑肌层明显增厚,管腔狭窄;W组、R组炎症反应较轻,气道壁各层(尤其是平滑肌层)厚度较A组明显降低,但较C组仍有增厚。2.支气管壁厚度(Wat)和平滑肌层厚度(Wam):C组大鼠Wat为62.76±7.05μm2/μm,Wam为18.21±1.53μm2/μm;A组大鼠Wat(91.76±6.23μm2/μm)和Wam(31.89±2.34μm2/μm)均较C组明显增高(P<0.01):W组Wat和Wam分别为78.31±4.87μm2/μm、26.29±2.50μm2/μm, R组Wat和Wam分别为75.40±4.82μm2/μm、25.61±2.98μm2/μm,两药物干预组与A组相比之间差异有统计学意义(P<0.01),和C组之间比较有统计学意义(P<0.01)。3.各组大鼠肺组织P-AKT免疫组化结果比较:P-AKT的阳性定位在胞浆,主要表达在气道上皮细胞和气道平滑肌细胞。A组阳性表达明显高于C组,W组和R组阳性表达明显低于A组,但仍高于C组。4.Western Blot检测各组大鼠肺组织的P-AKT表达情况:C组大鼠肺组织P-AKT光密度值为0.416±0.083;A组光密度值(0.958±0.156)较C组明显升高(P<0.01);W组光密度值为0.636±0.055, R组光密度值为0.752±0.056,两药物干预组均较A组明显降低(P<0.01),均较C组升高(P<0.01)。5.各组大鼠肺组织P-P70s6k免疫组化结果比较:P-P70s6k的阳性定位在胞浆,主要表达在气道上皮细胞和气道平滑肌细胞。A组阳性表达明显高于C组,W组和R组阳性表达明显低于A组,但仍高于C组。6.Western Blot检测各组大鼠肺组织的P-P70s6k蛋白表达情况:C组大鼠肺组织P-P70s6k光密度值0.144±0.025;A组光密度值(0.642±0.127)较C组明显升高(P<0.01);W组光密度值为0.253±0.039, R组光密度值为0.367±0.035,两药物干预组均较A组明显降低(P<0.01),均较C组升高(P<0.01)。7.RT-PCR检测各组大鼠气道平滑肌层cyclinD1mRNA表达情况:C组大鼠肺组织cyclinD1mRNA的OD值为0.493±0.156;A组大鼠OD值(1.671±0.360)较C组明显升高(P<0.01),W组大鼠OD值为0.924±0.143,R组大鼠OD值为0.883±0.126,两药物干预组较A组明显降低(P<0.01),但仍高于C组(P<0.01)。8.相关分析:直线相关分析结果显示:Wat、Wam均与P-AKT蛋白含量呈显著正相关(分别r=0.721, r=0.762,均P<0.01,n=24);Wat、Wam均与P-P70S6K蛋白含量呈显著正相关(分别r=0.831,r=0.732,均P<0.01,n=24);Wat、Wam均与cyclinD1mRNA含量呈显著正相关(分别r=0.742,r=0.766,均P<0.01, n=48)与和Wam呈显著正相关;P-AKT蛋白含量与P-P70s6k蛋白含量呈显著正相关(r=0.789,P<0.01, n=24);P-AKT蛋白含量与cyclinD1mRNA含量呈正相关(r=0.846,P<0.01,n=24);P-P70s6k蛋白含量与cyclinD1mRNA含量呈正相关(r=0.882,P<0.01)。结论:1.P-AKT及P-P70s6k在哮喘大鼠肺组织中表达增高,wortmannin明显抑制气道平滑肌增殖,表明PI3K信号转导通路在哮喘气道平滑肌增殖中起重要作用。2.cyclinD1在哮喘大鼠肺组织中表达明显增高,与P-AKT及P-P70s6k表达相一致,表明PI3K信号转导影响哮喘气道重塑部分通过激活cyclinD1实现。3.罗红霉素明显改善哮喘气道重塑,可能部分通过调控PI3K信号转导途径。