论文部分内容阅读
目的 探讨不同超声辐照参数对基因转染的作用,优化超声辐照参数提高基因转染效率,与此同时减少对细胞活性影响.方法 体外培养H9C2心肌细胞,随机分为6组：①单纯质粒组(C)；②超声(U)+微泡(M)组；③PEI(P)组；④P+M组；⑤P+U组；(6)P+U+M组.选取某一参数进行转染,转染12h、24 h、48 h及72 h后荧光显微镜观察H9C2心肌细胞中绿色荧光蛋白质的表达.荧光蛋白表达最佳组再设置不同参数,即改变超声强度、微泡浓度、辐照时间及质粒浓度等进行转染,辐照后以台盼蓝染色测定细胞存活率,流式细胞仪测EGFP质粒瞬时转染率,取得最佳的转染参数.结果 上述各组在12h、24 h、48 h及72 h荧光显微镜观察均可见荧光显示,但48 h表达最强,其中P+U+M组相比其他组绿色荧光蛋白质的表达最多.P+U+M组设置不同参数,当超声辐照时间及质粒浓度一定时,随着超声强度及微泡浓度的增加,基因转染效率逐渐增加,具有统计学意义(P＜0.05),但微泡浓度超过30％后,超声辐照强度超过1.5 W/cm2后基因转染效率不再升高,细胞死亡率明显增加.固定超声强度(1.5 W/cm2)、微泡浓度(30％)和质粒浓度(8μg/ml),改变时间(15s、30 s、45 s、60 s),结果显示超声辐照时间30 s时转染效率最高,细胞死亡率相对较少.超声强度(1.5 W/cm2)、微泡浓度(30％)及辐照时间(30s)不变时,随着质粒浓度的增加,基因转染效率增加,但质粒浓度增加到16 μg/ml时转染效率不再增加,而增加质粒浓度对细胞存活率无影响.结论 超声靶向破碎微泡联合PEI能显著增强EGFP质粒转染H9C2心肌细胞.根据不同参数转染后,30％的造影剂浓度、1.5 W/cm2的声强、30 s的辐照时间、16 μg/ml细胞转染效率最高,是H9C2心肌细胞的最佳转染条件.